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文献和实验或其他丝裂原。 2. 3 H -TdR(100μCi/ml) 3. 5%三氯醋酸、无水乙醇 4. 闪烁液:PPO 4g,POPOP 0.4g溶于1000ml二甲苯中。 5. 玻璃纤维滤膜及负压抽滤装置及β-计数仪; 操作方法 1. 刺激增殖反应: ①常规分离PBMC,用含20%NCS的RPMI-1640完全培养液调整细胞浓度至2.0×106 /ml; ②于96孔细胞培养板各孔中
溶解法)和滤膜法两类。 1) 均相法:是使培养物经过红细胞溶解,洗脱未被摄入的放射性物,沉淀大分子物质,并使之消化溶解,便于均匀分布在闪烁液中。上述方法即为均相法的一种。不同实验室的具体操作法和应用的试剂常有不同,溶解红细胞多用1%~3%醋酸,但也有使用蒸馏水。许多实验室多用5~10%三氯醋酸(TCA)沉淀大分子物质,使洗液不致流失,消化溶解,最后沉淀物多采用强酸和氢氧化钠。 2) 滤膜法:均相法处理样品须反复多次离心沉淀,操作繁琐,耗费时间,因此有逐渐被滤膜
管连接到废液瓶上,以免万一含3H(氚)的废液进入橡胶管。2、3ml 5%三氯乙酸固定、5 ml无水乙醇脱水(脱水后滤膜明显变白)。闪烁液的容水量很低,所以在加入闪烁液之前必须烘干。但加入一定量的醇类(如无水乙醇),则可容纳少量的处理后所残留的水分,但也仍需烘至接近干燥的程度,否则将发生浑浊而无法测定。据报道,如果闪烁液中加入1/3的异辛基苯氧聚乙氧乙醇(TritonX-100),其容水量可达15%,消化溶解后的样品,不必烘干,即可添加闪烁液测定。3、PHA、ConA、LPS等在正式实验前均需摸索最适
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