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文献和实验处(包括双链 DNA 断裂位点)的募集过程。采集的图像不仅帮助我们确定募集到断裂位点修复蛋白的动力学信息和聚集水平,还验证了内源转录调节因子和 DDR 通路因子在 DNA 断裂位点的共定位。 图 1:实验方案示意图 将 MRE11 cDNA 克隆到带有 GFP 标签的表达载体中,然后将其转染到 U2OS 细胞。在使用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)或 Hoechst 进行标记后,使用 FV3000 共聚焦显微镜的 405 nm 激光对核内目标区域(ROI)进行线扫描诱导 DNA 损伤。随后使用
。短暂低速离心后,立即放置于冰上5 min。 5.5 电泳: 5.5.1 将RNA样品小心加到点样孔中。 5.5.2 在5 V/cm下跑胶(5×14cm)。在电泳过程中,每隔30 min短暂停止电泳,取出胶,混匀两极的电泳液后继续电泳。当胶中的溴纷蓝(500bp)接近胶的边缘时终止电泳。 5.5.3 紫外灯下,检验电泳情况,并用尺子测量18S、28S、溴纷蓝到点样孔的距离。 注意不要让胶在紫外灯下曝光太长时间。 5.6. 转膜
快离子,而Gly的有效迁移率最慢成为慢离子,在样品胶和浓缩胶中所选用的pH值必须使有效迁移率满足下述条件: 快离子>样品离子>慢离子。因此在快离子后边形成一个离子浓度低的区域,即:低电导区,又因为E=I/η(E:电位梯度,η:电导率,I:电流)。低电导率将产生一个高电位梯度,因而在高电压梯度区和低电压梯度区之间,形成一个迅速移动的界面(如图1-2-11)。由于样品的有效迁移率恰好介于快慢离子之间,所以就聚集在这个移动的界面附近,被浓缩成一狭小的样品薄膜。 图1-2-11不连续电泳浓缩效应
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