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文献和实验2 1.2ml Trizol, lane3 1.5ml Trizol,lane4 2mlTrizol 以上用0.2倍体积氯仿,只用Trizol抽提一次 lane5 1ml Trizol,0.35体积氯仿,抽提一次 lane6 1ml Trizol, 0.35体积氯仿,抽提两次 lane7 1ml Trizol, 0.20体积氯仿,抽提两次 lane8 2ml Trizol,等体积氯仿 其中lane5为常规提取方法。 如果1-5有杂带,,67没有,说明是脑组织本身蛋白量和hnRNA过多
等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀,离心 4-5 min, 将上清转入一只新管中,加入 0.6-0.8 倍体积的异丙醇,轻轻混合直到 DNA 沉淀下来,沉淀可稍加离心。 6. 沉淀用 1 ml 的 70% 乙醇洗涤后,离心弃乙醇. 真菌 DNA 的提取: 方法一: 1. 取真菌菌丝 0.5 g, 在液氮中迅速研磨成粉 2. 加入 4 mL 提取液,快速振荡混匀 3. 加入等体积的 4 mL 的氯仿: 异戊醇 (24:1),涡旋 3~5 min
。加入甘氨酸可以消除甲醛使交联反应终止。1.1.准备两个长满细胞的150cm2的细胞培养皿(1*107-5*107 个细胞/皿)。将甲醛直接滴入PBS洗过的细胞培养皿中,使其终浓度为0.75%,然后在室温缓慢旋转10分钟,使蛋白和DNA发生交联。1.2 加入甘氨酸使其终浓度为125mM,在室温晃动孵育5分钟。1.3 使用10ml预冷PBS清洗细胞2次1.4 使用细胞刮将细胞收获放入 5ml 预冷PBS中,并转入50ml的管子。1.5.在皿里加入3mlPBS,将剩余的细胞转移到50ml管子里1000g
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