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- HZbscienc
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- HZ0521
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20摄氏度保存
- 保质期：
1年
- 英文名：
pKD46
- 库存：
大量
- 供应商：
上海沪震生物科技有限公司
- 规格：
盒
pKD46产品信息
订购信息
| 货号 | 载体名称 | 出品公司 | 载体用途 | 价格 | 到货周期 |
| HZ0521 | pKD46 | 基因敲除载体 | 1200 | 现货 |
产品参数
载体用途：Red同源重组基因敲除载体
克隆方法：多克隆位点，限制性内切酶
质粒大小：6329bp
原核抗性：Ampicillin（氨苄青霉素）
载体拷贝数：低
备注：需30℃培养
载体描述
pKD46是目前应用最广泛的Red同源重组基因敲除载体，其含有低拷贝温度敏感型的复制子oriR101，在30℃时培养时可以正常复制，而高于37℃时会自动丢失，便于质粒的消除。该质粒还含有受阿拉伯糖（araB）启动子调控的exo、bet、gam基因，它们通过L-阿拉伯糖诱导表达，并携带氨苄青霉素抗性基因作为筛选标记。
与同源重组基因敲除相关的3个酶：
1、Exo蛋白
Exo蛋白是一种核酸外切酶，单亚基的分子量为24 kD，Exo蛋白的活性形式是一种环状三聚物分子，中间有一中空的通道，通道的一端可容纳双链DNA分子，另一端只可容纳单链DNA。Exo蛋白可结合在双链DNA的末端，从DNA双链的5’端向3’端降解DNA，使DNA分子形成3’粘性末端。
2、Beta蛋白
Beta蛋白在Red同源重组中起着决定性作用，具有介导互补单链DNA退火的功能，是一种退火蛋白，单亚基的分子量为25.8 kD。在溶液中，Beta蛋白自发地形成环状结构，紧紧地结合在单链DNA的3’突出端，防止DNA被单链核酸酶降解，并介导互补单链DNA的退火。双链DNA退火完成后，Beta蛋白从DNA双链上解离下来。
3、Gam蛋白
Gam蛋白为16kD的多肽分子，可与RecBCD核酸外切酶结合，抑制其对外源DNA的降解作用，防止外源DNA 进入细胞后被宿主降解。
参考文献：
[1] Datsenko KA1, Wanner BL. One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products. Proc Natl Acad Sci USA. 2000,97(12):6640-6645.
[2] Doublet B, Douard G, Targant H, et al. Antibiotic marker modifications of lambda Red and FLP helper plasmids, pKD46 and pCP20, for inactivation of chromosomal genes using PCR products in multidrug-resistant strains. J Microbiol Methods. 2008,75(2):359-361. Doi: 10.1016/j.mimet.2008.06.010
质粒图谱
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文献和实验【求助】质粒有两个复制起始点，怎么复制呢？（red重组，pKD46质粒）
mnidr 我现在在做基因敲除，用的是red重组系统，pKD46质粒上携带有敲除所需的蛋白。pKD46质粒上有两个复制起始点Origin of Replication：repA101ts & oriR101 ；repA101ts是温度敏感型复制起始点。 有几个问题请教： 1.大家有用过这个pKD46的吗？oriR101是温度敏感型复制子还是条件诱导型复制子啊，我在网上查到它是温度敏感型复制起始点，我很不理解，为什么已经有一个温度
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