鱼脾脏白细胞分离液试剂盒

产品类别：脾脏白细胞的分离

产品编号：WBC1080FZK

产品名称：鱼脾脏白细胞分离液试剂盒

产品规格：200ml/KIT

产品价格：￥650.00元

本品用于分离鱼脾脏白细胞













“XXXX”动物脾脏组织白细胞分离液实验方法


技术文档编号：TBD0033SOP

【产品规格】

200ml/Kit

【产品组成】

为方便广大用户使用，试剂内容如下：

	名称	产品编号	规格
A	XXXX 动物脾脏组织白细胞分离液		200ml
B	样本稀释液（赠品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（赠品）	2010X1118	200ml
D	F 液（赠品）	F2013TBD	200ml
E	红细胞裂解液（赠品）	NH4CL2009	100ml
F	说明书		1 份

【实验前准备】

适用仪器：最大可提供 1200g 的水平转子离心机

【检验方法】

全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。

• 首先制备脾脏组织单细胞悬液，制备方法详见“脾脏组织单细胞悬液制备技术”。

• 取一支 15ml 离心管，加入与脾脏组织单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于 3ml）。

• 用吸管小心吸取脾脏组织单细胞悬液加于分离液液面上，500-800g，离心 20-30min。（注：根据脾脏组织单细胞悬液样本量确定离心条件，脾脏组织单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。

• 离心后用吸管小心吸取所有环状乳白色细胞层（一层或两层），加入 10 ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。250g，离心 10min。重复洗涤 2-3 次，即得所需白细胞。

• 如有红细胞残留请使用红细胞裂解液（产品编号：NH4CL2009）裂解红细胞，具体操作方法详见“红细胞裂解液使用说明”。

【注意事项】

• 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取样 2h 内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

• 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

• 分离液用量大于脾脏组织单细胞悬液样本量时，分离效果更佳。

• 如实验后细胞得率或活性过低，请联系技术支持以寻求帮助，。

【储存条件及有效期】

常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启

封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

【参考值（参考范围）】

本实验白细胞提取率及纯度大于 80%。

下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。

		红细胞			白细胞		血小板
				（4.0-10.0）×109
含量（个/L）		（4.0-5.5）×1012		中性粒细胞	淋巴细胞	单核细胞	（1.0-3.0）×1011
				50%-70%	20%-40%	3%-8%
【相关实验技术方案】
1.	脾脏组织单细胞悬液制备技术。
2.	所获得白细胞的培养技术。
3.	所获得白细胞的核酸提取技术。
4.	所获得白细胞的鉴定方法
	A.流式细胞技术
	B.免疫组化技术

C.原位杂交技术

D.PCR 技术

	【可能存在的问题及解决方法】
	1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
	出现情况	出现原因	建议解决方案
	离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层	转速过小或离心时间过短	适当增减转速
	离心后目的细胞存在于分离液中	转速过大或离心时间过长
	离心后白环层弥散	细胞密度过大	调整细胞密度
	离心后白环层太浅或看不见	细胞密度过小

• 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。

• 本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可

能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。

注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到最佳分离效果，

离心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。