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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温
- 保质期:
12个月
- 库存:
大量供应
- 供应商:
上海研谨生物科技
- 规格:
200ml/KIT
产品编号:WBC1090CPK
产品名称:鸡脾脏白细胞分离液试剂盒
产品规格:200ml/KIT
产品价格:¥650.00元
本品用于分离鸡脾脏白细胞
“XXXX”动物脾脏组织白细胞分离液实验方法
技术文档编号:TBD0033SOP
【产品规格】
200ml/Kit
【产品组成】
为方便广大用户使用,试剂内容如下:
| 名称 | 产品编号 | 规格 | |
| A | XXXX 动物脾脏组织白细胞分离液 | 200ml | |
| B | 样本稀释液(赠品) | 2010C1119 | 200ml |
| C | 清洗液(赠品) | 2010X1118 | 200ml |
| D | F 液(赠品) | F2013TBD | 200ml |
| E | 红细胞裂解液(赠品) | NH4CL2009 | 100ml |
| F | 说明书 | 1 份 | |
【实验前准备】
适用仪器:最大可提供 1200g 的水平转子离心机
【检验方法】
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
- 首先制备脾脏组织单细胞悬液,制备方法详见“脾脏组织单细胞悬液制备技术”。
- 取一支 15ml 离心管,加入与脾脏组织单细胞悬液等量的分离液(注:分离液最少不得少于 3ml)。
- 用吸管小心吸取脾脏组织单细胞悬液加于分离液液面上,500-800g,离心 20-30min。(注:根据脾脏组织单细胞悬液样本量确定离心条件,脾脏组织单细胞悬液量越大,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到最佳分离效果)。
- 离心后用吸管小心吸取所有环状乳白色细胞层(一层或两层),加入 10 ml 清洗液(产品编号:2010X1118),混匀细胞。250g,离心 10min。重复洗涤 2-3 次,即得所需白细胞。
- 如有红细胞残留请使用红细胞裂解液(产品编号:NH4CL2009)裂解红细胞,具体操作方法详见“红细胞裂解液使用说明”。
【注意事项】
- 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果,最好在取样 2h 内进行实验,样品存放时间越长,细胞分离效果越差。样品放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
- 本实验最好不要使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品,因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面,影响细胞分离效果。
- 分离液用量大于脾脏组织单细胞悬液样本量时,分离效果更佳。
- 如实验后细胞得率或活性过低,请联系技术支持以寻求帮助,。
【储存条件及有效期】
常温保存,有效期 2 年。本品易感染细菌,需无菌条件操作。无菌条件下操作,启
封后置常温保存。如 4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。
【参考值(参考范围)】
本实验白细胞提取率及纯度大于 80%。
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例,用户可适当进行参考。
| 红细胞 | 白细胞 | 血小板 | |||||
| (4.0-10.0)×109 | |||||||
| 含量(个/L) | (4.0-5.5)×1012 | 中性粒细胞 | 淋巴细胞 | 单核细胞 | (1.0-3.0)×1011 | ||
| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% | |||||
| 【相关实验技术方案】 | |||||||
| 1. | 脾脏组织单细胞悬液制备技术。 | ||||||
| 2. | 所获得白细胞的培养技术。 | ||||||
| 3. | 所获得白细胞的核酸提取技术。 | ||||||
| 4. | 所获得白细胞的鉴定方法 | ||||||
| A.流式细胞技术 | |||||||
| B.免疫组化技术 | |||||||
C.原位杂交技术
D.PCR 技术
| 【可能存在的问题及解决方法】 | ||||
| 1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示: | ||||
| 出现情况 | 出现原因 | 建议解决方案 | ||
| 离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层 | 转速过小或离心时间过短 | 适当增减转速 | ||
| 离心后目的细胞存在于分离液中 | 转速过大或离心时间过长 | |||
| 离心后白环层弥散 | 细胞密度过大 | 调整细胞密度 | ||
| 离心后白环层太浅或看不见 | 细胞密度过小 | |||
- 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心,其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时,恒定离心时间,对离心转速进行调整。
- 本分离液依照国际标准,全部使用药用级原料,性能指标与国产同类产品略有不同,可
能出现红细胞沉降不完全的情况,可以适当加大离心转速。
注:在对离心条件进行调整时,离心转速的加减以 50-100g 为基数,直至达到最佳分离效果,
离心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。
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文献和实验后细胞悬液呈暗红色,需将其进行适量稀释后再进行后续操作。 5)为保证细胞的活力,整个操作过程请轻柔,避免对细胞造成机械性的损伤。 6)为保持细胞状态良好,请尽量缩短整个试验的周期。 4 脾脏单个核细胞分离试剂盒 IPHASE/汇智和源针对不同种属动物脾脏单个核细胞分离的特点,开发了对应的单个核细胞分离试剂盒,包括人,猴,犬,大鼠,小鼠,兔,猪等。该试剂盒包含单个核细胞分离液和洗涤液两个组分,各成分对细胞无毒性,不会影响细胞的原始状态;同时,该试剂盒操作简单便捷,可大大缩短细胞分离时间
细胞筛网置于培养皿中,取小鼠脾脏放置于筛网中,加入 5ml 达优小鼠淋巴细胞分离液,对脾脏轻轻进行研磨(注:此步操作要快,避免分离液蒸发); 2. 把悬有脾脏细胞的的分离液立即转移至 15ml 离心管中,随后在分离液上层轻轻覆盖 500-1000μl 的 RPMI1640 培养基(保持分离液与培养基分界明显); 3. 室温,水平转子 800g 离心 30 分钟,设置离心机为缓升缓降; 4. 离心结束后吸出淋巴细胞层(白膜层),加入 10ml RPMI1640 洗涤一遍细胞,250g 离心 10
内腔可产生高强度的磁场,足以分离磁微粒标记的细胞,无需分离柱提供提供更高强度的磁场。由于磁微粒极小,不会影响靶细胞的流式分析结果,因此不需要去除。除了现有的定型产品外,客户可选择EasySep® PE、FITC或生物素分选系统与自己的PE、FITC或生物素—偶联的单抗相结合,来富集任何所需的细胞。如果您有自己的小鼠IgG1抗任何细胞的抗体, 也可以使用“Do-It-Yourself”试剂盒做成TAC,用来分选您想要的细胞。此外,还可以根据您的特殊需要,专门为您设计定做试剂盒。用于正选小鼠的细胞
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