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- 2025年12月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
PAT gene nucleic acid detection kit for transgenic plants (PCR- fluorescent probe)
- 库存：
10
- 供应商：
沪震生物
【包装规格】24/50/96测试/盒
【类别】PCR-荧光试剂盒
【运输】低温、避光、快递免费送货上门。
【用途】生化实验，合成实验等试验。
转基因植物PAT基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)常见问题：
一.没有扩增产物
1.循环温度：变性温度、退火温度
2.引物设计
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA样品
二.非特异产物及电泳呈涂布状
1.Mg2 浓度
2.调整引物、模板、聚合酶的用量
3.适当减少循环数
4.适当提高退火温度，缩短退火或延伸时间
转基因植物PAT基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的改进与完善：
Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段，其缺点是：
①Klenow酶不耐高温，90℃会变性失活，每次循环都要重新加，每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期，给PCR技术操作程序添了不少困难。
②引物链延伸反应在37℃下进行，容易发生模板和引物之间的碱基错配，其PCR产物特异性较差，合成的DNA片段不均一。
2）1988年初，Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR，其扩增的DNA片段很均一，真实性也较高，只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次，仍需加入新酶。
3）1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热DNA聚合酶。转基因植物PAT基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)此酶具有以下特点：
①耐高温，在70℃下反应2h后其残留活性大于原来的90%，在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%，在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%。
②在热变性时不会被钝化，不必在每次扩增反应后再加新酶。
③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率，增加了扩增长度(2.0Kb)。由于提高了扩增的特异性和效率，因而其灵敏性也大大提高。为与大肠杆菌多聚酶I Klenow片段区别，将此酶命名为Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的发现使PCR广泛的被应用。
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文献和实验一种基于手动芯片点样仪的快捷高效的转基因植物PCR-dot-blot鉴定法
为探针进行杂交，所得X光片成像结果如图2右侧所示。成像斑点清晰，三张重复膜的结果一致，被检转基因植株全为阳性，阴性对照处未检出杂交信号，阳性对照明显。 3、讨论 PCR的方法用于检测转基因植物非常简便，但是其高灵敏度的特点容易导致假阳性结果，须经PCR产物克隆测序最终确认，如果用于鉴定大批量的转基因植物将会相当的费时费力。为此我们借助芯片点样仪样品量少、操作方便、重复性好等优点，采用快速、安全的生物素标记探针杂交法对转基因植物的PCR产物进行鉴定。为保证结果的真实性，一方面将PCR
，中国科学家成功获得了首批(5只)转基因山羊。其中一只奶山羊的乳汁中，含有堪称血友病人救星的药物蛋白――有活性的人凝血因子。 目前，世界上已有数十家转基因动物公司，重点研究通过动物乳汁生产贵重的药用蛋白质和营养药物，一些走在前面的公司已获得巨大的经济效益。荷兰一家公司用转基因牛生产乳铁蛋白，每年销售额达数亿美元；英国罗斯林研究所(第一个研究出克隆羊)用转基因羊生产可治疗肺肿的一种蛋白酶，每升羊奶可售6000美元。饲养转基因动物将成为具有高额利润的新型高科技产业。 在转基因植物方面
转基因植物的研究主要在于改进植物的品质，改变生长周期或花期等提高其经济价值或观赏价值；作为某些蛋白质和次生代谢产物的生物反应器，进行大规模生产；研究基因在植物个体发育中，以及正常生理代谢过程中的功能。 以植物作为生物技术的实验材料有其特定的优点，那就是植物细胞大部分都有全能性 (totipotency) ，可以用单个细胞分化发育出整个植株。这样，经过基因工程改造的单个植物细胞有可能再生成一棵完整的转基因植株。这些植株还可通过有性生殖过程把改变了的性状遗传给下一代
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