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- 2025年11月03日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Classical swine fever virus (CSFV-W) nucleic acid assay kit (RT-PCR)
- 库存：
10
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
次
【包装规格】24/50/96测试/盒
【类别】PCR-荧光试剂盒
【运输】低温、避光、快递免费送货上门。
【用途】生化实验，合成实验等试验。
猪瘟病毒野毒株(CSFV-W)核酸检测试剂盒(RT-PCR法）常见问题：
一.没有扩增产物
1.循环温度：变性温度、退火温度
2.引物设计
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA样品
二.非特异产物及电泳呈涂布状
1.Mg2 浓度
2.调整引物、模板、聚合酶的用量
3.适当减少循环数
4.适当提高退火温度，缩短退火或延伸时间
猪瘟病毒野毒株(CSFV-W)核酸检测试剂盒(RT-PCR法）的改进与完善：
Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段，其缺点是：
①Klenow酶不耐高温，90℃会变性失活，每次循环都要重新加，每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期，给PCR技术操作程序添了不少困难。
②引物链延伸反应在37℃下进行，容易发生模板和引物之间的碱基错配，其PCR产物特异性较差，合成的DNA片段不均一。
2）1988年初，Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR，其扩增的DNA片段很均一，真实性也较高，只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次，仍需加入新酶。
3）1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热DNA聚合酶。猪瘟病毒野毒株(CSFV-W)核酸检测试剂盒(RT-PCR法）此酶具有以下特点：
①耐高温，在70℃下反应2h后其残留活性大于原来的90%，在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%，在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%。
②在热变性时不会被钝化，不必在每次扩增反应后再加新酶。
③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率，增加了扩增长度(2.0Kb)。由于提高了扩增的特异性和效率，因而其灵敏性也大大提高。为与大肠杆菌多聚酶I Klenow片段区别，将此酶命名为Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的发现使PCR广泛的被应用。
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文献和实验；（5）10000×g，4 ℃ 离心 15 min，弃上清。用 70% 乙醇漂洗，10000×g 离心 5 min，弃上清, 室温蒸发乙醇；（6）用适量的无 RNase 污染的水溶解 mRNA。此 mRNA 可用于 Northern 印迹，RT-PCR 及核酸保护试验。若长期保存，可加入 3 倍体积的无水乙醇，置-70 ℃。【注意事项】（1）因为 RNA 易被 RNase 降解；整个操作不能有 RNase 的污染，同时要注意无菌操作。（2）所有试剂的配制均用 DEPC 处理过的水（3）加入 3 倍体积的 100
方法没有离子辐射且价格便宜，其成本约为几千美元。这种装置的另一个优点是它的工艺及实施以常用的光盘和单元电话为基础的，从而简便、易行。 5.2 分子信标技术用于SARS的诊断 2003年SARS病毒在中国内地的出现以及在全球部分国家的肆意和传播，给人类健康提出了严峻的挑战。许多国家的科研人员都在开发快速和精确检测SARS病毒的方法和技术，诸如RT-PCR、ELISA、免疫荧光法等，并已经在推出相应的检测试剂盒。但是，目前这些检测仍然需要结合临床体征的判断，这主要是由于这几种方法还存在
原位聚合酶链式反应（in situ PCR）和原位反转录聚合酶链式反应（in situ RT-PCR）操作规程
（ 2 ）加上杂交液，湿盒内 50 ℃过夜； 杂交液组成： 25 ％硫酸葡聚糖， 2×SSC ， 50 ％甲酰胺， 0.33mg/ml 变性的鲑鱼精子 DNA ， 每 0 ． 5mL 杂交液内含生物素标记探针 1ng 。 （ 3 ）扩增的β - 肌动蛋白和 IL-6 用 DAKO 检测试剂盒 K600( 链霉卵白素，生物素标记的碱性磷酸酶和硝基四氮唑蓝 ) 检测。阳性反应呈紫色。 相关RT-PCR产品: 电泳设备 紫外
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