支原体检测试剂盒特价优惠

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名称：支原体检测试剂盒特价优惠
品牌：百奥莱博
编号：QN1316
规格：100T-200T
产地：国产|进口
英文名：Mycoplasma Detection Kit
本试剂盒是利用荧光染料检测支原体污染。这种染料会结合到DNA的A-T富集区域，因为支原体的DNA中A-T含量高(55％～80％)，所以可将其染色而被检测到。被支原体污染的细胞经染色后在细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点，即为支原体的DNA染色斑，说明有支原体污染。Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm;Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。

操作步骤：

贴壁细胞：
1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中，接种密度为1-2×104。同时，接种正常无支原体感染的同种细胞，作为阴性对照。
2.5天后，先吸去培养液，再加入1ml的固定液，静置20min，
3.吸去固定液，晾干。
4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞)，37℃避光放置15-20min或室温静置20～30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后加入一滴封片液，并以盖玻片覆盖。
6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。

悬浮细胞：
1.收集需检测的细胞，1500rpm，5min。
2.将收集的细胞涂片于载玻片上，再加1ml的固定液，静置20min。
3.吸去固定液，晾干。
4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞)，37℃避光放置15～20min或室温静置20～30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液，用无菌水洗涤玻片3次，直接风干。风干后加入一滴封固液，并以盖玻片覆盖。
6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。

结果判断(参考)：
阴性：仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。
阳性：除细胞外，细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。

注意事项：
1.Hoechst工作液对人体有害，请注意防护。
2.固定液有刺激性气味，建议在通风橱进行固定。
3.支原体检测时，最好用不含抗生素的培养液培养2～3代，这样容易避免假阴性结果。
4.本试剂盒用于6孔板检测时，可以进行50次检测反应。
5.检测支原体污染，可以使用支原体高效Vero细胞，这样可以提高检测灵敏度，即将被检测样品接种于Vero细胞进行检测。

储存条件：4℃避光，有效期2年

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·SABC免疫组化试剂盒(山羊IgG)(FITC荧光显色)
编号：QN1224
英文名称：SABC(Goat IgG)-FITC Kit
规格：100T-200T
本试剂盒适合于一抗为山羊IgG来源的免疫组化实验.，FITC荧光检测。

试剂盒组份：
封闭液(5% BSA)-——————10ml
Bio-兔抗山羊IgG浓缩液———100ul
SABC-FITC浓缩液——————100ul
稀释液-——————————30ml
抗荧光衰减封片剂-—————10ml

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的FITC将保证SABC具有很高的敏感性。

操作步骤：(以石蜡切片热修复为例)
1. 切片常规脱蜡至水。
2. 可选步聚：
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M 柠檬酸钠缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.4)洗涤1-2次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃，10分钟，PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。
c、跳过此步，直接进入下一步。
3. 滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
4. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周)，也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37℃ 孵育1小时左右或20℃ 2小时左右，也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
5. 根据使用量,用稀释液将Bio-兔抗山羊IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul Bio-兔抗山羊IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加Bio-兔抗山羊IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟。
6. 根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-FITC工作液，20-37℃孵育30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
7. 滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。

对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Trxiton X-100室温孵育20分钟， PBS漂洗两次，接上述第3步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，再接上述第2步。

注意事项：如果背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗2次，然后封片观察。


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