SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(FITC荧光/DAB显色

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名称：SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(FITC荧光/DAB显色)库存
产地：国产|进口
英文名：SABC(Rabbit IgG)-FITC(POD) Kit
品牌：百奥莱博
规格：100T-200T
本试剂盒适合于一抗为兔IgG来源的免疫组化实验，提供DAB及FITC两种显色方式。

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶或者FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶与FITC将保证SABC具有很高的敏感性。

试剂盒组分：
封闭液（5% BSA）———————————10ml
生物素标记羊抗兔IgG浓缩液-——————100ul
SABC-FITC浓缩液-———————————100ul
SABC-POD浓缩液————————————100ul
稀释液————————————————30ml
20×DAB显色液A————————————1ml
20×DAB显色液B————————————1ml
抗荧光衰减封片剂———————————10ml

操作步骤:(以石蜡切片热修复为例)
1、切片常规脱蜡至水。3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶(如果FITC，可省掉此步)。蒸馏水洗3次。
2、热修复抗原：将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0)，电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。
3、滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
4、用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周)，也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37℃ 1小时孵育左右或20℃ 2小时左右，也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
5、根据使用量，用稀释液将bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul bio-羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗兔IgG工作液，20-37℃ 处理30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟。如果用荧光观察，请接步骤6、7，如果用DAB显色，请直接转至步骤8。
6、根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃，30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
7、滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
8、根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液，混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
9、DAB显色:根据用量，用PBS(pH7.2-7.4)配制，按1ml PBS加入50ul 20×DAB显色液A，加入50ul 20×DAB显色液B ，混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
10、苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

对于细胞爬片：常规固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%Txiton X-100室温20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2(如果用FITC，刚可省掉此步)处理15分钟;PBS漂洗两次，下接上面第4步。
对于冰冻切片：固定后，可用PBS漂洗两次，再接上面第二步。

注意事项：
1、如果用DAB染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。
2、如果用FITC观察背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗涤2次，然后封片观察。
3、因为免疫组化指标众多，标本不一，此步骤仅作参考。

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·通用引物 ITS2
编号：QN0955
英文名称：Universal primers ITS2
规格：250μl(10uM)
储存条件：-20℃

·L-甲状腺素
编号：QN0019
英文名称：L-Thyroxine
规格：1g
CAS：51-48-9
分子式：C15H11I4NO4
分子量：776.87
别名：2-甲状腺素;左旋甲状腺素;左甲状腺素;甲狀腺素
储存条件：2～8℃

·肌红蛋白
编号：QN0313
英文名称：Myoglobin
规格：100mg

别名：肌球蛋白;肌红蛋白;肌血球素;肌球素
CAS号：100684-32-0
储存条件：−20℃
性状：红棕色粉末
溶解性：溶于水，溶解后由红色变为棕红色澄清液体，溶解度为10mg/ml。

·超氧化物岐化酶
编号：QN0463
英文名称：Superoxide Dismutase from bovine erythrocytes lyophilized powder
规格：15KU
催化超氧化物自由基的歧化反应生成过氧化氢和氧分子。在细胞防御氧自由基的毒性作用方面发挥着重要作用。与一氧化氮 (NO) 竞争超氧化物阴离子(可与 NO 反应形成过亚硝酸盐)，因此 SOD 能促进 NO 的活性。在培养的大鼠卵泡、神经细胞系和转基因小鼠中，SOD 也表现出抑制细胞凋亡的作用。

别名：SOD;超氧化物氧化还原酶
CAS号：9054-89-1
酶活：5673 units/mg protein
性状：冻干粉
来源：牛红细胞
储存条件：−20℃

·SDS(十二烷基硫酸钠)
编号：QN0244
英文名称：Sodium dodecylsulfate
规格：100g|500g
本品SDS主要用于从蛋白质中分离核酸，从宿主细胞中脱落某些病毒;蛋白电泳试剂，也可用于质粒提取。

别名：月桂基硫酸钠;十二烷基硫酸氢钠
CAS号：151-21-3
分子式：C12H25O4SNa
分子量：288.38
储存条件：密封阴凉干燥保存
性状：白色粉末

SDS生物学应用：
(1)SDS是阴离子表面活性剂常用于蛋白质和类脂类的电泳分离。当其与蛋白质混合,质量比达到1.4:1时，SDS能破坏蛋白质分子间以及其他物质分子间的非共价键使蛋白质的构象发生变化继而使蛋白质变性解离成单一亚基，从而降低或消除了各种蛋白质分子间的天然电荷差异。电泳常用10%的SDS作为储备液。
(2)SDS可以迅速破坏组织结构，抑制RNase和脱氧核糖核苷酶(DNase)活性，所以SDS也是核酸纯化试剂的关键组分。通常使用10%或者20%的SDS储备液，SDS的工作浓度是0.1-0.5%。
SDS贮存条件：密封阴凉干燥保存;
SDS毒性：低毒，大鼠经口半数致死量为1288mg/kg。有刺激性。

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