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文献和实验问:大家好,请问有人做过逆转录病毒包装吗,我最近在用PT67包装病毒,按照说明书上的要求,在细胞长到70%左右汇合时加入质粒和脂质体和无血清培养液培养4小时后更换为完全培养基继续培养24小时后加300μg/MLG418筛选,现在加药已经36个小时了,可是看细胞长的密密麻麻的大概有100%了吧,还不见细胞往下掉,我真是急死了,300μg/ml的筛选浓度是我在预实验里确定的应该错不了,可是为什么加药以后细胞还不死呢,说明书上说70%汇合时转染后还要继续培养24-36小时再加药,我知道这是要让抗性
基因编辑再次升级!领域大牛刘如谦 Cell 发文开发新工具,可安全高效进行体内基因编辑
而实现体内高效递送。 实验结果表明,eVLPs 可实现向人类原代细胞和小鼠多种组织(肝脏、大脑、眼睛)中高效递送治疗性蛋白 RNP 复合物,并在小鼠体内疾病模型中取得了良好的治疗效果。在将脱靶效率和 DNA 整合风险降至最低的同时实现治疗性蛋白 RNPs 在体内的高效递送,具有巨大的应用前景。 图片来源:Cell 主要研究内容 基于逆转录病毒的高效 BE-VLPs 首先,他们试图研究逆转录病毒是否能够以一种保持碱基编辑器活性的方式支持有效的 BE-VLP 的形成。作为第一代 BE-VLP
细胞,并在细胞中表达。Hock等选用了缺失编码病毒外壳蛋白基因的逆转录病毒,因此不能合成自身的外壳,但它有识别外壳蛋白进行包装的信号(一段尚未鉴定的DNA顺序)。用这种缺陷的逆转录病毒去感染某种细胞株,这种细胞株包含有辅助病毒(helpervirus)。辅助病毒能合成蛋白外壳,但缺失了识别蛋白外壳进行包装的信号,因此它不能包装成病毒颗粒。当用逆转录病毒感染细胞株后,逆转录病毒的RNA进入辅助病毒的外壳蛋白,成为病毒颗粒。这时把受感染的细胞同骨髓细胞一起培养,包装在辅助病毒外壳蛋白中的逆转录病毒RNA,进入
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