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文献和实验浅析染色质免疫沉淀(ChIP)技术在 DNA 与蛋白质相互作用研究中的重要性
-19]; xChIP:用来研究DNA及低结合力蛋白,采用甲醛或紫外线进行 DNA 和蛋白交联,超声波片段化染色质,然后进行片段富集及后续分析,适用于多数非组蛋白的蛋白,例如 [9, 15, 20]。 X-ChIP 试验的一般过程 以上两种方法在分离 DNA-蛋白质复合物之后,对 DNA 进行 PCR 扩增,验证目标序列的存在。除验证实验外,ChIP DNA也可以进行测序分析,这种方法被称为 ChIP-seq [22] ;也可做芯片分析,这种方法被称为 ChIP on CHIP 或 ChIP
-2 Digitonin 235 1,229 70,000 - - C12 E8 - 542 65,000 0.005 8.7 x 10-5 Lubrol PX - 582 64,000 0.006 1.0 x 10-4 Triton X-100 - 650 90,000 0.021 3.0 x 10-4 Nonident P-40 - 603 90,000 0.017 3.0 x 10-4 Tween 80
完整蛋白质从 SDS-PAGE 胶中的电洗脱及其 MALDI-TOF MS 分析
) 为标准 样品,发现这种方法比被动洗脱的效果好。当凝胶上样量为5jug 时,回收效率分别为: BSA 8 9 % 和 PhosB 5 8 % ^ 被 动 洗 脱 ( 将捻碎的蛋白质条带浸泡在I X 电泳缓冲液过夜) 无法回收到磷酸酶B ,并且只能回收加样的 B S A 的 39 % ( 表 27-1)。在 进 行 MALDITOF M S 之前,将浓缩蛋白质与基质共结晶,进一步去除残留杂质。混合蛋白质溶液 和基质溶液[芥子酸,l 〇 mg/m L 溶于乙腈/水 (3 : 7)],置
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