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- 2025年07月13日
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- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物
- 肿瘤类型：
见说明书
- 品系：
细胞系
- 组织来源：
肝癌
- 相关疾病：
见说明书
- 物种来源：
人
- 免疫类型：
见说明书
- 细胞形态：
见说明书
- 是否是肿瘤细胞：
见说明书
- 器官来源：
肝癌
- 运输方式：
长温运输
- 年限：
永久
- 生长状态：
贴壁
- 规格：
1*10（6）/ml
问题1：培养液pH 值变化太快
可能原因
（1）CO2 张力不对
（2）培养瓶盖拧得太紧
（3）NaHCO3 缓冲系统缓冲力不足
（4）培养液中盐浓度不正确
（5）细菌、酵母或真菌污染
建议解决方法
（1）按培养液中NaHCO3 浓度增加或减少培养箱内CO2 浓度，2.0g/L 到3.7g/L 浓度NaHCO3 对应CO2 浓度为5％ 到10％。
（2）松开瓶盖1/4 圈。
（3）改用不依赖CO2 培养液。加HEPES 缓冲液至10 到25mM 终浓度。
（4）hepAD38(人肝癌细胞)在CO2 培养环境中改用基于Earle′s 盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks 盐配制的培养液。
（5）丢弃培养物，或用抗生素除菌。
问题2：培养液出现沉淀，但pH值不变
可能原因
（1）洗涤剂清洗后残留有磷酸盐，将培养基成分沉淀下来
（2）冰冻保存培养液
建议解决方法
（1）用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后灭菌。
（2）将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。
问题3：培养液出现沉淀， 同时pH 发生变化
可能原因
细菌或真菌污染
建议解决方法
丢弃培养物，或用抗生素除菌。
问题4：培养细胞不贴壁
可能原因
（1）胰蛋白酶消化过度
（2）支原体污染
（3）培养瓶瓶底不干净
（4）培养液pH值过碱（NaHCO3分解）
（5）消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当
（6）细胞老化（如传代前细胞已汇合导致失去贴附性）
（7）接种细胞起始浓度太低或太高
建议解决方法
（1）hepAD38(人肝癌细胞)缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。
（2）分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
（3）注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶
（4）使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2（将培养液敞口放入培养箱也可）
（5）重新配置消化液或培养液
（6）启用新的保种细胞
（7）调节最佳接种细胞浓度
问题5：悬浮细胞成簇
可能原因
（1）培养液中含钙、镁离子
（2）支原体污染
（3）蛋白酶过度消化使得细胞裂解释
（4）DNA污染
建议解决方法
（1）用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。
（2）分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物。
（3）用DNase I 处理细胞。
问题6：原代细胞培养物污染
可能原因
原代培养组织在进入培养前已污染
建议解决方法
培养前用含高浓度抗生素的平衡盐溶液反复冲洗组织。
问题7：培养细胞生长减慢
可能原因
（1）由于更换不同培养液或血清
（2）培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。
（3）培养物中有少量细菌或真菌污染
（4）试剂保存不当
（5）接种细胞起始浓度太低
（6）细胞已老化
（7）支原体污染
建议解决方法
（1）hepAD38(人肝癌细胞)比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验。让细胞逐渐适应新培养液。
（2）换入新鲜配制培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子。
（3）用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物。或用抗生素除菌。
（4）血清需保存在-5℃ 到-20℃。培养液需在2－8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存，并在2 周内用完。
（5）增加接种细胞起始浓度。
（6）换用新的保种细胞。
（7）分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
问题8：培养细胞死亡
可能原因
（1）培养箱内无CO2
（2）培养箱内温度波动太大
（3）细胞冻存或复苏过程中损伤
（4）培养液渗透压不正确
（5）培养液种有毒代谢产物堆积
（6）更多原因参考问题4和问题7
建议解决方法
（1）检测培养箱内CO2
（2）检查培养箱内温度
（3）取新的保存细胞种
（4）检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260–350 mOsm/kg。加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压。
（5）换入新鲜培养液
（6）更多解决方法参考问题4和问题7.
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文献和实验【求助】测试p38功能变化仅测磷酸化的P38就可以了，为何还要测总P38呢？
伽利略 我一直都不太明白，请达人解释下，谢谢 bigbang_0_0 蛋白质功能上的变化包括质变和量变两种，所以要检测总的p32蛋白水平。 George2 测总P38是为了了解P38的表达背景，以估测激活的P38占总量的比例。 伽利略 我是这样想的，请问有何问题 P38磷酸化水平若增高不论是否P38总量变化，都能说明P38活跃或者激活，不测P38
yzzaici888 大家好，本人最近一直在做p-p38的磷酸化，但是一直都做不好。希望各位大侠帮助解决： 蛋白上样量80-100ug，半干转膜70min，5%BSA封闭70min，一抗CST（#9211） 1：500加，4℃孵育过夜，二抗1:8000加室温70min。曝光出的结果很不好，杂带很多，也分析不出那条是目的条带，且没有趋势，见下图 15001046419
内寿命这一概念。 WI38细胞是有限传代性人的二倍体成纤细胞系的代表，显有约 55PDL的寿命（参见细胞集团倍化数），作为标准株，应用于各种研究。也就是说，此有限增殖能力，可认为是正常的多细胞生物增殖性体细胞老化的试管内模型，广泛应用于细胞老化的研究。另外，作为正常细胞在癌研究中用作对照，或用作致癌研究的材料，因它对人所能感染的病毒有广泛的感受性，所以在感冒病毒（ Rhimovirus）的分离，制作脊髓灰质炎疫苗及其他疫苗等方面都有用。
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