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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 亚型:
IgG
- 形态:
液态/冻干粉
- 保存条件:
-20℃保存
- 克隆性:
多克隆
- 标记物:
FITC
- 宿主:
Rabbit
- 应用范围:
ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-2049 (石蜡切片需做抗原修复) not yet tested in other applications.
- 浓度:
1586mg/ml
- 抗体英文名:
TST/Thiosulfate sulfurtransferase
- 规格:
0.1ml 0.1551ml
【抗体的鉴定】
筛选杂交瘤细胞通过选择性培养而获得杂交细胞系中,仅少数能分泌针对免疫原的特异性抗体。一般在杂交瘤细胞布满孔底1/10面积时,即可开始检测特异性抗体,筛选出所需要的杂交瘤细胞系。
检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同,选择不同的筛选方法,一般以快速、简便、特异、敏感的方法为原则。
【抗体溶解方法】
方法1:我们的抗体(冻干粉)已经包含了0.01M PBS、1% BSA和0.1% 防腐剂(叠氮钠或庆大霉素),您只需要加入灭菌的双蒸水就行了。抗体溶解后,置于-20℃保存,最好分装后使用,避免反复冻融,可保证至少1年有效;
方法2:也可以只加入一半体积的双蒸水,再用一半体积的甘油补足,置于-20℃保存,这样抗体不会冻,有利于抗体的稳定。
后续试验时,再使用对应的缓冲液稀释成工作液,即用即配。
我们的抗体(冻干粉),在常温放置下,至少一个月有效;若在-20℃下保存(推荐),至少三年有效。
Antibodies are prepared with 0.01M PBS, pH 7.4 with 1% BSA and 0.1% Sodium Azide, prior to lyophilization. Currently, we offer both lyophilized and reconstituted antibodies, both resulting in final concentration of 1mg/mL. We recommend two ways to reconstitute antibodies in lyophilized form:
1) Reconstituting by directly adding 100uL of sterile, distilled water.
2) Alternatively, if glycerol does not affect the experiment, add 50uL sterile distilled water, followed by adding 50uL of glycerol.
修复液:0.01M 枸橼酸(pH6.0)或者0.05M EDTA(pH8.0)
【抗体修复方法】
方法1:沸水浴修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境,保持外部沸腾状态15min,自然冷却至室温;
方法2:微波修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中,高火5min,停火3min,中火5min,自然冷却至室温。
DAB溶液配制:(组化及Western blot 显色)
称DAB 30mg,用0.05mol/L pH7.6 Trs-HCL缓冲液100ml溶解,如有沉淀,过滤后使用,一般新鲜配制使用;
使用前加入1% H2O2 1ml至1.5ml,H2O2浓度为0.01%,混均后使用。7、3′,3′,5′,5′,-四甲基联苯胺(TMB)
【溶液配制】
用二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)或无水乙醇,将TMB配成1%浓度,4°C保存半年以内使用;
使用前,用pH5.0磷酸-柠檬酸底物液9.9ml加入0.1ml(1mg/TMB)1% TMB溶液中,再按每毫升TMB加入30% H2O2 1ul,混匀后立即使用。2N H2SO4终止后,450nm测定OD值。
8、1%离子琼脂胶配制液
作免疫双相扩散,单相扩散及免疫电泳中使用。
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文献和实验(一)石蜡切片IGSS(1)切片脱蜡至水。(2)0.1%胰蛋白酶37℃消化20min或抗原修复20min(98℃),自然冷却至室温。(3)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×3min.(4)l%EA(卵蛋白)15min,不洗。(5)适当稀释的特异抗体室温4h或4℃孵育20h,或37℃孵育1h.(6)0.05m01/L(pH7.4)TBS洗3×5min.(7)0.02m01/L(pH7.4)TBS(内含0.1%BSA)洗10min.(8)1%EA 15min,不洗,1:10~1:20稀释
%硫酸钠-20%硫代硫酸钠混合液固定1~3rain,或用1%戊二醛固定5min,50℃温水洗3~6min. (20)衬染:核固红衬染3min或甲基绿衬染3min. (21)常规脱水,树胶封片。 (22)镜检:阳性物质呈黑色或黑褐色,颗粒分布于抗原-抗体反应部位;背景较干净,呈红色。 (二)双PAG法的敏感性 应用本法对keratin、AFP、HBsAg、FN、SOD、HCG、F8、P53等组织抗原的定位,连续4gm石蜡切片,同时用IGSS和双PAG法,不同的一抗稀释度,结果双PAG法
内,4℃过夜; (4) TBS洗三次,每次5min,再用蒸馏水洗后,将切片放入硝酸银显色液,避光显色5-10min; (5) 用蒸馏水冲洗,2%铁氰化钾和1%溴化钾作用1min; (6) 用蒸馏水冲洗,彩色显色液显影; (7) 用蒸馏水冲洗,依次与2%铁氰化钾和1%溴化钾作用1min;5%硫代硫酸钠和1%亚硫酸钠作用5min,自来水冲洗,缓冲甘油封片; 【结果观察】 镜检,抗原抗体反应处呈兰色(a-萘酚)或绿色(菲尼酮)。
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