- ¥1786
- Biotium
- 40069
- 2025年07月16日
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100ul
如何能够高效灵敏的检测死细菌中存在的活细菌数量在实际应用中至关重要，包括食品安全检查，饮用水质量控制和药物诊断等。而传统使用的细菌培养的检测方法，既费时又不够灵敏。
以PCR为基础的替代检测方法具有快速和高灵敏度特点。然而，基于 PCR的检测方法并不能有效的将活细胞和死细胞区分开来。近年来，Biotium公司研发的新型DNA修饰染料-叠氮碘化丙锭 (PMA™) 成功的克服了该难题。只需在进行PCR检测前使用PMA预处理细菌样本，就能够选择性的检测活细菌，此方法敏感性高，检测结果可靠。
PMA™ 是一种与DNA具有高度亲和性的光反应染料。该染料可以嵌入在双链DNA中，当暴露在强烈的可见光下时可以与DNA形成共价连接，从而实现对DNA的化学修饰。而经修饰后的DNA将不能通过PCR进行扩增 (Figure 1)。 由于PMA™ 被设计为不能被细胞膜穿透性，因此当使用该染料处理同时包含死细菌和活性菌的样品时，只有细胞膜结构受到破坏的死细菌中的DNA能够被化学修饰。接下来可以进一步裂解活性菌并进行qPCR检测，从而实现对活性菌的选择性检测。同时，PMA™-PCR技术不仅能够应用于细菌检测，同样也可以用于其他微生物的检测（详见PMA™ 应用列表）。
| 图2(A)：大肠杆菌PMA™-qPCR扩增曲线图。未经处理和经过热激灭活的大肠杆菌分别使用PMA染料进行预处理，然后进行qPCR检测。 qPCR 使用16S rRNA 引物。 |
图2(B)：活、死大肠杆菌经PMA™处理和未经PMA™处理后的ΔCt值。(ΔCt = Ct with PMA™ – Ct without PMA™). |
New! PMAxx™ for Viability PCR
图3: PMAxx™ 和PMA™ 在检测死细菌和活性菌中的区别。
PMAxx™作为PMA™的替代升级产品，具有更高的灵敏性。尽管PMA能够通过qPCR有效的区分死细菌和活性菌，但并不能够完全排除来自死细胞DNA的PCR产物，从而带来潜在的假阳性结果。作为Biotium公司的新型染料，PMAxx™能够更加高效的抑制死细胞中DNA的PCR扩增，从而更好的区分死细菌和活性菌。
Download the PMA™ and PMAxx™ flyer to learn more.
New! PMA™ Enhancer for Gram-Negative Bacterial
图4：经温和热激（56℃ 3小时）灭活的大肠杆菌进行PMA™或 PMA™+Enhancer处理，用PMA-Lite光分解后提取DNA。随后使用Fast EvaGreen® qPCR Master Mix扩增大肠杆菌DNA中377-bp片段。qPCR结果表明与PMA™单独处理的死细胞相比，PMA™+Enhancer处理过的死细胞扩增Ct明显延迟，而只使用Enhancer处理则对样品PCR没有影响。
PMA™ Enhancer能够有效地改善通过PMA™来区分革兰氏阴性菌中死细菌和活性菌。我们提供的PMA™ Enhancer为5倍浓缩液，可在使用PMA™之前添加到样品中。当对经过Enhancer预处理过的革兰氏阴性菌中的 进行PCR检测时，样品中死细胞的信号明显减弱，而活细胞的信号则没有变化。PMA™ Enhancer也可以与PMAxx™作为搭配使用。因此，同时使用PMA™ 和PMA™ Enhancer可以有效的对革兰氏阴性菌进行viability PCR检测。 PMA™ Enhancer作为一个独立的产品提供。另外，在PMA Bacterial Viability Kits（革兰氏阴性菌专用）中也包含该产品。
New! PMA™ Real-Time PCR Bacterial Viability Kits
PMA™-PCR试剂盒可以用来通过使用PMA™染料和qPCR选择性的检测特定菌群中活细菌。试剂盒包含PMA™或PMAxx™染料，Fast EvaGreen qPCR Master Mix和经过验证的PCR引物，可以用于检测食品安全，公共卫生和 抗菌研究广泛关注的特定菌株。
试剂盒包含：
• PMA™或PMAxx™染料
• Fast EvaGreen qPCR Master Mix
• ROX 校正染料
• PMA Enhancer（仅适用于革兰氏阴性菌）
• 特定菌株经验证的PCR引物
PMA Real-Time PCR 细菌活力检测试剂盒适用于:
- • 沙门氏菌
- • 结核分歧杆菌
- • 金黄色葡萄球菌
- • 金黄色葡萄球菌（耐甲氧西林）
- • 李斯特菌
- • 大肠杆菌
- • 大肠杆菌 O157:H7
- • 嗜肺军团菌
更多详情请下载 PMA Real-Time PCR Kits.
用于PMA光分解的PMA-Lite™光解仪
Biotium 公司提供的PMA-Lite™ LED 光分解仪， 可以用来对PMA及其他光反应染料进行控制时间和温度的光处理。
产品特性:
- • 可以同时为18个小离心管样品提供均匀照明；
- • 内置风扇能够保持温度低于37℃；
- • 四种照明时间的选择（10，15，20 ，30 分钟）；
- • 配备长寿命的LEDs 灯（465-475 nm）；
- • 能够有效激活PMA™，EMA 或其他类似染料。
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文献和实验【资源】一种被广泛用于实时定量 PCR 的绿色荧光 DNA 染料
曲线（HRM）分析。由于EvaGreen®染料在光谱特性上类似于 FAM 以及 SYBR Green I ，因此这种染料兼容所有商业化的 qPCR 仪器。此外，和 SYBR GreenI 以及 SYBR GreenER 不同的是， EvaGreen®染料非常稳定且无致突变性和细胞毒性。? Cheetah Taq:Cheetah Taq 是Biotium公司的一种新型化学修饰的热启动 DNA 聚合酶。和 AmpliTaq Gold 不同的是， Cheetah Taq 在标准热启动条件下（例如：使用 pH
替代品。GelRed----真正安全无毒的核酸凝胶染料GelRed and Gelgreen 核酸凝胶染料最灵敏 , 最稳定的核酸凝胶染色试剂，是真正的EB替代产品！由美国BIOTIUM公司技术专家研发的GelRed 和GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的高效荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成任何环境污染。目前大多数商业化的核酸染料（凝胶染色试剂）总是在安全性、稳定性和灵敏性等方面不完全令人满意：EB (溴化乙啶）作为目前使用最广泛
的改变抗体的等电点，进而影响抗原抗体的特异性结合反应。综合以上内容，Biotium 的科学家用革命性的方法设计出近红外染料C F，在避免引入大量负电荷的情况下，极大的保证了染料优异的理化特性。Biotium 近红外的CF 染料以花青或罗丹明染料为核心结构，该核心结构的特殊化学修饰限制了染料的分子内位移，从而获得染料的高量子产率和更好的水溶性。因此，近红外CF染料比其他近红外染料荧光强度更高，光稳定性好。最重要的是，在免疫印迹实验上应用近红外CF染料标记蛋白质样品相对于其他商业用近红外染料制备的抗体
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