Western封闭液(奶粉)

Western 实验步骤

。 2） 取出洗过的印迹膜，放入封闭缓冲液中（5% 的脱脂奶粉或 5% 的 BSA），摇床摇动，室温封闭 1.5-2 小时。 抗体的孵育 主要采用间接法，即先加入未标记的特异性一抗，抗体与膜上的抗原蛋白结合，再加入酶标（过氧化物酶或碱性磷酸酶）二抗进行检测。 1） 向封闭后的印迹膜中加入稀释过的特异性一抗，4 ℃ 孵育过夜。 2） 洗涤缓冲液洗膜 10 分钟 ×3 次。 3） 加入稀释后酶标二抗，室温孵育1小时，洗膜 3-6 次，每次 10 分钟。 检测 根据标记二抗的标记物的不同，其结果检测

Western Blot，如何成功优化？

Western Blot 现在仍然是检测和分离蛋白最常用的一种实验方法，但是要想得到较好的结果并不容易，只有找到合适的实验条件并进行优化，才能以更少的时间得到更多的结果，达到事半功倍的效果！下面是 R&D Systems 品牌为您推荐的免疫印迹优化步骤和实验涉及参考数据：一抗浓度对实验结果的影响抗体：Human/Mouse/Rat RSK1 Antibody (Catalog # AF992)样本：人 HeLa 细胞 (Fig.1)A：5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于

关于脱脂奶粉和BSA作为封闭剂的一些问题

相关专题 生物实验中的封闭剂 Q：western blot 中脱脂奶粉封闭的是哪些蛋白?原理是什么? A：脱脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原 的蛋白去封闭膜，避免标记抗体固定在膜上引起背景增高。 Q：请问封闭液和抗体稀释液用BSA 和脱脂奶粉有什么区别呢? 有人跟我说奶粉的封闭效果更好些，但是通常只能用于WesterBlot，如果要做ELISA或者phage display