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- KALANG
- 中国大陆
- KL-D3433
- 2025年07月16日
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- 技术资料
- 保存条件：
冷藏
- 保质期：
长期
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20次
ECL发光Marker
规格：20次● 储存条件：-20℃保存，开封后有效期12个月
● 产品简介：
ECL发光Marker是一种新型可视的 Western Blot（蛋白免疫印迹法）蛋白标准，可在同一膜上实现与目的蛋白同时显示，而无需任何附加步骤和额外的试剂。此蛋白标准由六种带有IgG 抗体结合位点的蛋白组成，分子量范围在 15-95kD。即用型，冰浴融解后即可使用。
● 使用说明：1．ECL发光Marker彻底溶解后，混匀上样（2-10 μl）；
2．待测蛋白样品上样；
3．常规聚丙烯酰胺凝胶电泳；
4．参照具体仪器说明，将蛋白转移至合适的膜上；
5．参照目的蛋白抗体说明书，进行膜封闭、一抗孵育、二抗孵育及相应的膜洗涤；
6．化学发光检测，具体方法参照相关产品说明。
● 注意事项：1．本产品为即用型产品，融解混匀后即可使用，无需加热等处理。
2．本产品的最优上样量与实验中所用抗体有关，来源不同的抗体与不同来源 IgG 的亲和力不同，见下表：种属来源 亲和力
人、兔、豚鼠、猴 ＋＋＋＋
小鼠、猪、狗、猫 ＋＋＋
驴、仓鼠 ＋＋
大鼠、山羊、绵羊、牛 ＋
● 问题及解决：ECL发光 Marker 的使用规范及其使用范围请详细阅读上文，下表列出了实验中可能出现的问题及相应的解决方法，敬请参考：问题 原因 解决方法
条带弱或者没有条带 上样量偏少 加大上样量
转膜不充分 参照仪器使用说明书，优化转膜条件，或使用蛋白预染 Maker判断转膜效果
检测系统所用试剂失效 确认使用的检测试剂正常工作，优化一抗、二抗及检测底物的反应条件（浓度、温度、时间）
抗体没有有效结合 ECL发光 Marker 不同来源的抗体及其亚型与 ECL发光 Marker的结合效果差异明显，请根据实验具体情况加以选择
条带过亮呈弥散状，甚至无法区分条带 ECL发光 Marker上样量偏多 减少上样量
抗体浓度过高 降低一抗、二抗使用浓度，优化抗体反应条件
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文献和实验Ecl 显色原理：鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。 试验步骤： 1）将两种显色底物1：1等体积混合（一般各1ml/membrane）。 2）将混合物覆盖在膜表面，1-2分钟，摇晃使均匀。 3）用保鲜膜把膜包起来，放入夹板中。 4）在暗室中将X光片，覆盖在膜的上面，夹好夹子，曝光1min。 5）显影、定影。 6）根据结果调整曝光时间和曝光区域，得到
蛋白质免疫印迹（Western Blot ）-底物化学发光 ECL 法
蛋白质免疫印迹（Western Blot ）可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA 相互作用后续分析。实验方法原理———底物化学发光 ECL 法Western 免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与 Southern 或 Northern 杂交
一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。 1．HRP-ECL 发光法： 将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于 A、B 混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带（5 min 左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中 1～2 min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定
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