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- 2025年09月29日
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赫澎（上海）生物
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订购赫澎生物产品，享受实验指导、实验开展指导、疑难问题解决。
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文献和实验，最近一次的western blotting 没有做出来，最后成像能看见marker的条带，但是就是看不见目标蛋白，整个图像模糊一片，很花。补充说明：整个操作很顺利，就是最后加显像液的时候保鲜膜有点皱。是因为封闭的原因？漂洗？还是什么原因，恳请高手指点？ javier211 我先试着解释一下楼主的问题吧。 1、蛋白质的修饰，诸如磷酸化、乙酰化等，会使其分子量稍微变大，但一般不至于从39kDa增至49kDa。所以建议查阅相关文献，看看国外学者做出
检测自噬 marker LC3B（~14-17 kDa），则应避免使用 Cofilin 或 Cyclophilin B（~20 kDa）这些分子量与目标蛋白接近的内参蛋白。√ 表达水平：选择的内参蛋白需要在待测样本中是高表达的。常用的内参蛋白是由管家基因高表达的，是细胞发育和维持细胞活力所必须的。例如，细胞核的内参蛋白 PCNA，在 DNA S 期表达，因此对于非增殖细胞不推荐使用。√ 表达因素：选择表达不受实验变量影响的内参，例如，细胞应激反应中 HSP60 会表达上调，因此在研究细胞应激实验中
内参就是内部参照，一般是指管家基因编码表达的蛋白，它们在各个组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照参。内参则可以校正蛋白质定量、上样过程中存在的误差，保证实验结果的准确性。 此外，内参可以作为空白对照，还可以检测蛋白转膜情况是否完全、整个 WB 显色发光体系是否正常。内参抗体种类很多，比如 β-Actin、β-Tubulin、GAPDH 等，下面简单介绍下如何选择内参。 一、目的蛋白分子量 选择内参抗体时，应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的
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