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- DSMZ细胞
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- ACC--1482
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃冻存
- 保质期：
二年
- 英文名：
SSP-25
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
1x10^6 cells
细胞英文(简称）:SSP-25
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:肝胆管癌
细胞形态:贴壁
细胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:RPMI-1640 +10% FBS；37℃，5% CO2
传代方法建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:完全培养基50%+40%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液，放置一个干净离心管内。（为稍后终止消化作准备。）
3、 用PBS清洗培养皿，弃去。
4、 向瓶内加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆盖培养瓶底为宜。（一般一个大皿1ml）
5、 2-5分钟后，轻轻震荡培养皿。使SSP-25人肝胆管癌细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清（即原培养液）终止消化。
6、 收集细胞悬液，880转/分、5分钟离心，弃去上清液。
7、 加培养液至1ml，混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中，再加入相应体积的培养液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈，使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤：
1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许，用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察，计算计数板八大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml＝8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏：
SSP-25人肝胆管癌细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
1．冻存细胞
（1）选对数增生期细胞，在冻存前1d换液。
（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×106／m1左右密度，离心，去上清。
（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤
（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m1悬液。
（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，作好标记。
（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度,在30～40 min时间内,下降到液氮表面，再停30 min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。
标准程序：
当温度在-25℃以上时， 1～2℃/min
当温度达-25℃以下时， 5～10℃/min
当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中
简易程序：
将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
（1）从罐中取出冻存管。
（2）迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。
（3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
（4）SSP-25人肝胆管癌细胞低速离心(880r／min) 5 min，去上清后再用培养液洗一次。
（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分，密度应达到107／m1，在融后稀释20倍后，仍能保持5×105／m1数量。
| DSMZ细胞库 | ACC 743 | GCT-27 | ACC 139 | PLB-985 | ACC 529 | OCI-M1 | ACC 12 | JVM-2 | ACC 458 | BEWO |
| DSMZ细胞库 | ACC 539 | DB | ACC 261 | DU-145 | ACC 735 | HT-93 | ACC 574 | SUP-HD1 | ACC 635 | 293T |
| DSMZ细胞库 | ACC 113 | MB-L11 | ACC 359 | DBTRG-05MG | ACC 722 | OCI-LY1 | ACC 512 | ARH-77 | ACC 118 | XC |
| DSMZ细胞库 | ACC 340 | M3E3/C3 | ACC 643 | SH-2 | ACC 302 | CAL-51 | ACC 654 | GI-ME-N | ACC 641 | ST |
| DSMZ细胞库 | ACC 188 | PAB-100 | ACC 260 | RD-ES | ACC 581 | HCT-116 | ACC 14 | KG-1 | ACC 550 | C6 |
| DSMZ细胞库 | ACC 184 | D-36 | ACC 213 | A4-840 | ACC 648 | DND-39 | ACC 672 | UPCI-SCC-200 | ACC 747 | SUSA |
| DSMZ细胞库 | ACC 148 | NEURO-2A | ACC 277 | DK-MG | ACC 537 | ME-1 | ACC 47 | DOHH-2 | ACC 101 | N4TG3 |
| DSMZ细胞库 | ACC 441 | MS-5 | ACC 315 | HT-1080 | ACC 265 | LXF-289 | ACC 387 | KYSE-450 | ACC 281 | 2A1 |
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文献和实验PCR-SSP检测人类白细胞抗原（HLA）B27表达水平的研究
者其患AS的几率为7.3%。因而，HLA-B27测定成为临床AS诊断与鉴别诊断的主要手段。本文拟建立一种PCR-SSP分子生物学检测技术，探讨HLA-B27的表达水平。我们对门诊骨科及住院骨科、内分泌科共124例患者，利用PCR-SSP技术，进行HLA-B27检测，现报告如下。 二、材料与方法 1. 方法 （1）DNA的提取检测取上述已抗凝混合匀的血液标本500 μ l放进1.5 ml 反应试管中，加700 μl 的ELB溶液，然后混合均匀（用吸管反复吸挤）。用低渗溶血法分离白细胞
生物学技术的不断发展和对人类血小板抗原基因结构研究的突破性进展，使血小板基因分型更为简捷准确。笔者采用PCR序列特异引物技术（PCR-SSP）对HPA-1～4这4个比较重要的血小板抗原系统进行了基因分型研究。1、材料与方法1.1 样本 25名健康献血者静脉采血0.5ml，ACD抗凝。1.2 基因组DNA抽提 采用蛋白酶K消化，酚/氯仿抽提DNA。1.3 引物 DNA序列特异性引物设计参照文献方法，一共12条，合成序列见表1。内对照为人类生长激素（HGH）基因特异性引物，序列：HGH-1s
摘要 应用序列特异引物聚合酶链反应（PCR-SSP）技术对181例临床标本进行HLA-B27检测，同时作血清学试验。结果：PCR方法和血清学方法分析结果基本相符，PCR分型无假阳性及假阴性，血清学方法1例假阳性及1例假阴性，表明PCR方法灵敏度高、特异性好、准确、较之血清学方法更适合于临床。 关健词 PCR-SSP HLA-B27 人类白细胞抗原B27（HLA-B27），是诊断强直性脊柱炎的指标之一，对强直性脊柱炎的早期诊断和预后以及对类风
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