PTFE膜盘式过滤膜，1 µm， 25 mm，Zefluor

用于蛋白质表达和纯化的pET-32α（+）载体的构建

，或者可以表达以产生重组蛋白。pET-32α（+）载体系列用于表达与109 aa Trx•Tag™硫氧还蛋白融合的肽序列。它属于一种表达系统，可在其激活后产生所需的蛋白质。插入原核宿主细胞。原核细胞如大肠杆菌因为它们廉价，快速的生物量积累和简单的工艺规模扩大，因此是外源蛋白表达的首选宿主。在本文中，我们将重点总结这种在我们的实验室中使用的有用技术。表达后pET-32α（+）载体的构建，蛋白质表达和蛋白质纯化将在本文中详细描述。获得用于构建载体的外源DNA片段插入载体的DNA通常可以使用聚合酶链式反应（PCR

师弟问了我 25 个引物相关的问题

1.      引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。 DNA 合成仪有很多种 , 主要都是由 ABI/PE 公司生产，而 Bioneer自行研制 的专利 384并行高通量 DNA合成仪， 可实现 99% 的高合成率。无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。亚磷酰胺三酯法合成 DNA 片段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将 DNA 固定在固相载体上完成

RNA-biotin based pulldown assays for the detection of siRNA targeted genomic regions and siRNA directed histone modifications (PROT32)

the 3 hour incubation Dynabeads™ M-280 Streptaviden magnetic beads (7x107 beads, ~100µl/sample) are added to the respective samples (note 1);5.The resultant siRNA/Flag complexes are then eluted with magnetic bead binding, the solution can be discarded