超滤浓缩管（Nanosep、Nanosep MF、Micro

影响蛋白超滤的因素以及使用超滤膜的注意事项

一般是目标分子量的1/3-1/5; 如果希望目标物透过，膜孔径需要是目标分子量的5-10倍。 所以剩下的，你就可以自己判断了。 用30k的膜多数情况下不能完全截留30k的分子，一定有一部分会透过膜，但也常常会有一部分被截留。 (十)问题：狠狠心买了一个包装的millipore超滤离心管，用了一支没结果，问问清楚： 1。用于同一种样品的浓缩，可以重复使用该离心管吗?——我用一支管子(15ml)分次离心了60ml的样品，浓缩到250ul

一篇搞定 IP、co-IP 实验

糖，建议进行 Pre-clear；如果使用磁珠，此步可忽略 抗 X 抗体的轻链（25 kD）和重链（50 kD） 更侧重于如何在实验上进行优化（见下文） *注意：总蛋白上样量过多也会造成 非特异性结合，建议上样量为 500 ug-1 mg。上样之前一定要先用 BCA 定个量！定个量！定个量！ pre-clear：上样前先用裂解液过一遍柱子，减少基质本身对蛋白的吸附 Output：在某些 co-IP 实验中，实验人员会把IP后的上清分别进行诱饵蛋白 X 和靶蛋白 Y 的 WB 检测

western blot注意事项

4）抗体浓度太高，或孵育时间太常都可能遇到这种情况。 5) 曝光时间的控制。 11、没有信号 1) 用单抗时比较容易出现这种情况。 2) 蛋白的表达量 3) 蛋白转膜效率 4) 一抗二抗的效价问题 12、微量进样器堵了怎么办？ 首先从预防入手，每次用后的进样器及时用蒸馏水清洗！ 如果堵了，不要紧，有办法：可以用如下办法解决： 1）首先反复推拉上样针，看是否可将堵塞物吹出来； 2）方法 1 不灵，若是 25 或 50ul 的针，把针从后侧拔出，然后重新插入