AcroSep 离子交换层析柱，CM Ceramic Hyp

免疫磁性微珠分离法分离T淋巴细胞和B淋巴细胞

1. MACS柱的准备新MACS柱需高压灭菌，60℃烘干后备用。使用前（至少2h前）应准备完毕。将2～3个C型MACS柱内分别用10ml注射器在柱下三通阀们处加入10mlMACS柱浸湿液，使液面达到柱内铁丝基质平面上2～3Cm处，关闭柱下三道阀们备用； 2. 将人PBMC悬液或淋巴细胞悬液（含2×108 个细胞）离心，重新悬浮于0.15ml MACS染色洗涤液中，加入生物素标记的CD4单抗和抗CD8单抗各25ul（比例为0.05ug/106 个细胞），冰浴孵育25min。用MACS染色洗涤液洗涤2次

消除非特异性染色的方法

中（悬于大于标记物体积约50～100倍的PBS内），在4℃中透析，每日更换3～4次PBS，约5～7天，透析液中无荧即可（在荧光光源照射下）。 　　（3）葡聚糖凝胶G-50柱层析法 　　除游离荧光素可用2×46cm柱层析法，详细方法参阅第二章　。加入荧光抗体15～18ml（按床体积的5%～10%加样），使其缓慢渗入柱内，待即将全部入柱时，加入PBS少许，关闭下口，停留30～40min ，使游离荧光充分进入细筛孔中，然后再接通洗脱瓶开始滴入洗脱液。加入洗脱液一定量后，荧光抗体即向下移行，逐渐

免疫荧光非特异性染色的消除

2×46cm柱层析法，详细方法:加入荧光抗体15～18ml（按床体积的5%～10%加样），使其缓慢渗入柱内，待即将全部入柱时，加入PBS少许，关闭下口，停留30～40min ，使游离荧光充分进入细筛孔中，然后再接通洗脱瓶开始滴入洗脱液。加入洗脱液一定量后，荧光抗体即向下移行，逐渐与存留于上端的游离荧光素之间拉开明显的界线，随着大量洗脱液的不断加入，二者分离距离越来越大，荧光抗体最先流出，分前、中、后三部分收集，测F/P比值，合格者合并，浓缩，分装。洗脱液用20%磺基水杨酸测定蛋白（发生沉淀