AcroSep Heparin HyperD M 亲和层析吸

对比 Strep-tag 与 His-tag 系统异同点？

为His-tag 与 Strep-tag® 系统的耐受缓冲液对比 如果分离纯化膜蛋白或包涵体时，则纯化过程需要涉及到变性条件。 Strep-tag®系统最多允许的尿素浓度为6M，盐酸胍为1M，而His-tag 则为8M和6M。如若需要增加蛋白的溶解度，使用去垢剂，则两种系统均可兼容Triton-X100，Tween 20和Nonidet P40。 但不是所有的蛋白过表达后都在包涵体内，且膜蛋白仅占细胞表达蛋白的20%-30%。 因此，如果纯化过程需要考虑特殊的纯化条件，两种系统是都可以选择的。但如果比较

聊一聊蛋白纯化都在讨论的质与量

系统，都使用了亲和层析法来纯化得到所需的蛋白质，为目前所常用的技术方法。 His-tag 系统又很高的蛋白产量（5～40 mg/mL resin），但理想情况下的纯度约为 80% 左右。但如需在随后的分析中测量蛋白质的功能，就需要再进行更多的 cleaning steps； Strep-tag® 系统一步纯化满足的纯度可达到 95%，无需进行更多的纯化步骤即可直接进行蛋白的分析，产量数据为 16 mg/mL。 深度对比 Strep-tag® 与 His-tag His-tag

v468 Chapter 2 Wnt活性蛋白分离及应用

(Cibacron Blue F3G-A coupledto Sepharose), ~100 mL packed into an empty column with100–200 mL of bed volume. 3. Binding Buffer: 1% (w/v) CHAPS, 150 mM KCl, and 20 mMTris-HCl, pH 7.5, sterile filtered. 4. Elution Buffer: 1% (w/v) CHAPS, 1.5 M KCl