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上海研谨生物科技有限公司
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文献和实验压下尽快进行(要快速建立真空且持续时间不要过长,否则,过滤板就会过于渗漏)。 ( 6 ) 另一个高通量纯化蛋白质的方法就是应用 Qiagen BioRobot 8000 和 Ni-NTA Superflow 96 BioRobotKit (Qiagen) 系统 [14],使用与手工纯化相同的缓冲液来裂解、冲洗和洗脱 (见 28.2.1)。与手工纯化方法相比,机器自动纯化方法的劣势就是实验药品消耗较大,以及洗脱体积无法调节到低于 350 μl。用手工纯化方法,洗脱体积可从 30~80 μl
量的细胞存在。个人认为,对照组和处理尽量不要分开计数,因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。如果需要对细胞预处理而不得不分开计数,那么计数一定要多重复几次,力求准确,尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。 三、接种细胞 ① 取细胞悬液100-200 µl加入Transwell小室,不同公司的、不同大小的Transwell小室对细胞悬液量有不同要求,请参考说明书。24孔板小室一般200 µl。 ② 24孔板下室一般加入500 µl含FBS或趋化因子的培养基,不同的培养板加的量有不同要求,具体请
取出生1-2d的乳鼠,用麻醉剂处死。在D-hanks液中取大脑并分离海马组织,胰蛋白酶消化,获得细胞悬液,胎盘蓝染色进行死活细胞记数,将细胞以5×105/ml的密度接种于预先经L-多聚赖氨酸处理的96孔和24孔培养板,其中24孔板中预先放置有盖玻片。细胞维持在培养液中,置入5%CO2,饱和湿度的培养箱中培养,24h后全换液,接种当天为第一天,每3d半量更换培养液一次,培养第3天时加入阿糖胞苷,终浓度为10μmol/L,以抑制神经胶质细胞的过度增殖,24h后更换全部培养液继续培养,第10
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