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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-80℃冻存
- 保质期:
二年
- 英文名:
Jurkat
- 库存:
20
- 供应商:
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格:
1x10^6 cells
细胞英文(简称):Jurkat
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:淋巴
细胞形态:悬浮
细胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
细胞检测细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:RPMI-1640 +10% FBS;37℃,5% CO2
传代方法建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:90%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液,放置一个干净离心管内。(为稍后终止消化作准备。)
3、 用PBS清洗培养皿,弃去。
4、 向瓶内加入消化液(胰蛋白酶液)。以能覆盖培养瓶底为宜。(一般一个大皿1ml)
5、 2-5分钟后,轻轻震荡培养皿。使Jurkat;人急性T淋巴细胞白血病细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清(即原培养液)终止消化。
6、 收集细胞悬液,880转/分、5分钟离心,弃去上清液。
7、 加培养液至1ml,混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中,再加入相应体积的培养液。(90mm大皿是9ml,中皿好像是4mm,6孔板和小皿是2ml,96孔板是100ul)。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈,使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤:
1、将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许,用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察,计算计数板八大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算:
细胞数/ml=8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏:
Jurkat;人急性T淋巴细胞白血病细胞冻存和复苏的原则:慢冻快融
当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶;相反,结晶很大,大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。
1.冻存细胞
(1)选对数增生期细胞,在冻存前1d换液。
(2)按常规方法把培养细胞制备成悬液,计数,使细胞密度达5×106/m1左右密度,离心,去上清。
(3)加入配制好的冻存液(培养液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10%二甲基亚砜(DMSO) 或甘油,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤
(4)分装于无菌冻存管中,每管加1.5m1悬液。
(5)旋好冻存管并仔细检查,一定要盖紧,作好标记。
(6)冻存:在特殊的仪器或简易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40 min时间内,下降到液氮表面,再停30 min后,直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促进冰晶形成。
标准程序:
当温度在-25℃以上时, 1~2℃/min
当温度达-25℃以下时, 5~10℃/min
当温度达-100℃时,可迅速放入液氮中
简易程序:
将冷冻管(管口要朝上)放入纱布袋内,纱布袋系以线绳,通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口,按每分钟温度下降1~2℃的速度,在40分钟内降至液氮表面,停30分钟后,直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套,以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
(1)从罐中取出冻存管。
(2)迅速放入37℃水浴,不时摇动,使其急速融化,30~60s内完成。
(3)冻存管用70%酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
(4)Jurkat;人急性T淋巴细胞白血病细胞低速离心(880r/min) 5 min,去上清后再用培养液洗一次。
(5)用培养液适当稀释后,装入培养瓶37℃培养,次日更换一次培养液后,继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分,密度应达到107/m1,在融后稀释20倍后,仍能保持5×105/m1数量。
| ECACC细胞库 | 89022402 | 3T3(+3) | 91012317 | L14 | 94060902 | FTC-238 | 6120602 | KARPAS 384 | 85020203 | MRC-7 |
| ECACC细胞库 | 89030316 | A2 | 91012318 | L23 | 94062922 | DH82 | 94072021 | KYSE-270 | 85020204 | IMR-90 |
| ECACC细胞库 | 89030317 | P22 | 91012319 | L35 | 94071258 | GRL101 (MIX) | 89062003 | SCC-9 | 85020205 | Vero76 |
| ECACC细胞库 | 89031603 | BT | 91012320 | L45 | 94071259 | GRL101 (KC7) | 6011801 | 1777N Rpmet | 85020206 | Vero C1008 [Vero 76, clone E6, Vero E6] |
| ECACC细胞库 | 89031604 | LC540 | 91012321 | L52 | 94072011 | KYSE-30 | 96020944 | NCI-H510A | 85020207 | Hep-2C (HeLa derivative) |
| ECACC细胞库 | 89031605 | I-10 | 91013163 | Ptk1 | 94072236 | COLO 775 | 96020930 | AsPC-1 | 85022102 | RAJIA |
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文献和实验按FAB形态学分类,可将急性淋巴细胞白血病分为三种亚型: 1.L1型 以小细胞为主,核染色较粗,每例结构一致。核型规则呈圆型,偶有凹陷或折叠,核仁小而不清楚或不见。胞浆少,轻度或中度嗜碱性,胞浆有空泡不定。 2.L2型 以大细胞为主,混有一定数量的小细胞,大小不等明显。核染色质疏松,每例结构不一致。核形不规则,凹陷和折叠常见。核仁清楚,一个或多个,胞浆量不定常较多,浆深浅不一,有的深染,浆液可有空泡。医学教育网搜|集整理 3.L3型 以大细胞为主,大小较一致。核
Jurkat细胞(人外周血白血病T细胞),是一种悬浮细胞。我的经验如下:1、培养液:RPMI1640,15%小牛血清,2%Na2CO3,1%HEPES,青霉素100IU/1ml,庆大霉素100IU/ml;2、培养条件:5%CO2,37度,30%湿度;3、细胞复苏:要快速将冻存管放入37度水中,不断轻轻摇晃,直到细胞完全溶解,加入10ml左右的培养液,800~1000rpm,10分钟离心,之后倒掉液体,加入新的培养基就可以进行培养了;4、细胞培养:起初进行传代时由于细胞刚刚复苏,长得比较
骨髓增生极度或明显活跃,少数病例是增生活跃,以原始和幼稚淋巴细胞为主,大于30%,可高达50%一90%胞核形态不规则,可有凹陷、折叠、切迹、裂痕,红细胞系统、粒细胞系统增生受抑制,巨核细胞系减少或不见,血小板减少,退化细胞增多。 按FAB形态学分类,可将急性淋巴细胞白血病分为三种亚型: 1.L1型:以小细胞为主,核染色较粗,每例结构一致医学教育|网搜集整理。核型规则呈圆型,偶有凹陷或折叠,核仁小而不清楚或不见。胞浆少,轻度或中度嗜碱性,胞浆有空泡不定。 2.L
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