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- 2025年07月16日
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上海希言科学仪器有限公司
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文献和实验曲线分析. 依据PDs 和扩增产物的熔解温度( Tm) 特点,在通用的三步法的延伸步骤之后,增加一个短暂的(5 s) 恒温和荧光检测步骤,使这个步骤的温度高于PDs 的Tm ,但低于扩增产物的Tm ,简称该法为四步法. PDs 的Tm 通常高于72 ℃,但低于扩增产物的Tm . 将四步法第四步的温度设置在高于PDs 的Tm ,但低于扩增产物的Tm 时,四步法能够有效地消除PDs 的影响. 对三步法和四步法SYBR green Ⅰ实时定量RT-PCR 进行了比较,发现三步法根本不能用于RNA 的实时定量,而四
【求助】谁有用SYBR Green法做mi-RNA得实验流程及相关步骤原理，谢谢共享
如来的观音 如题，谢谢 zjubell 建议先google一下，至少有些基础的认识。 原理其实很简单的，用一个带loop的引物去做逆转（单链也行，但带loop的效率会高一些） 然后正向引物是特异性引物，反向引物其实是一条通用引物，与loop结合的。 再用普通的sybr green直接定量PCR即可。 一个样本，一个miRNA几百元其实比较贵了。 提RNA，逆转，引物，我觉的50块钱么差不多
四步法消除SYBR Green Ⅰ实时定量RT2PCR中引物二聚体
分别进行了凝胶电泳检测和熔解曲线分析. 依据PDs 和扩增产物的熔解温度( Tm) 特点,在通用的三步法的延伸步骤之后,增加一个短暂的(5 s) 恒温和荧光检测步骤,使这个步骤的温度高于PDs 的Tm ,但低于扩增产物的Tm ,简称该法为四步法. PDs 的Tm 通常高于72 ℃,但低于扩增产物的Tm . 将四步法第四步的温度设置在高于PDs 的Tm ,但低于扩增产物的Tm 时,四步法能够有效地消除PDs 的影响. 对三步法和四步法SYBR green Ⅰ实时定量RT-PCR 进行了比较,发现三步
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