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上海希言科学仪器有限公司
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文献和实验免疫检测法的精确性表现为单次实验孔间(批内)的重复性和多次实验之间(批间)的重复性。CV 值高则表明精确度低,通常由以下两个原因造成:移液技术和洗涤技术。 移液技术 移液时,枪头应对准孔中央,避免接触孔壁及底部。 移液后轻轻晃动混匀试剂。 如果您的样品具有黏性,请预先润洗枪头以消除表面张力的影响。吸液时等待片刻使体积平衡后再取出。 移液不充分或移液体积不均,说明移液器需要校正。必要时请检查移液器并重新校正。 加样时,不同的试剂标准品和样本间都要确保更换枪头,避免交叉污染。 确保使用合适
比,其计算公式是。 绝对定量的数据易于理解,但是绝对标准品的制备和测定其DNA含量比较困难。有许多商业性的标准品试剂盒供选购,可以解决这种困难。 相对定量的标准品容易在实验室里自己制备,但是数据处理比较麻烦,对实验数据的解释有一定难度。13. 定量PCR基因表达的实验数据应该如何处理? 总的来说,有三个层次的校正是必须要做的。 首先,参比信号校正。试剂中必须包含固定浓度的ROX,这样由于反应总体积的差异、所在孔的位置不同、试管壁的厚度差异、管盖透光性能的差异等所引起的荧光信号波动都能够被扣
扩增曲线的分析攻略。 1、确认软件设置是否正确 对照试剂盒说明书,检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是,需要看下所选用的试剂中是否含有 ROX 来作为参比荧光染料。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器可以用 ROX 来作为参比荧光染料,用以校正仪器系统以外的物理误差,比如均一化校正由于移液误差或者蒸发导致的批内体积误差等。目前市面上有的的荧光定量 PCR 预混液是不含有 ROX 的,当用此类试剂的时候,应该将 ROX 参比
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