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- 2025年12月20日
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文献和实验、靶细胞分别收集1×106 Panc1以及从6例肿瘤组织中分离获得的胰腺癌细胞(编号S1-S6), 重悬于0.5mL不含碳酸氢钠的完全培养液. 加入3.7 MBq 51Cr铬酸钠, 37℃水浴中标记1 h, 洗涤细胞三次, 调整细胞浓度为5×104/mL.3、细胞毒效应向96孔板加入靶细胞, 每孔100 μL. 按效应细胞:靶细胞= 50:1的比例向各孔加入100 μL不同效应细胞. 每组均设3个复孔, 阴性对照孔(自发释放)只加100 μL完全培养液, 阳性对照孔(最大释放)加100 μL 1
培养液调整细胞浓度至1×105/ml，如暂时不用，可放置4℃冰箱内保存。同时应检测细胞的51Cr标记率，一般要求标记率>0.1cpm/细胞； 2. 效应细胞的制备：常规方法分离PBMC或小鼠脾细胞，用完全RPMI-1640培养液配制成1×107/ml的细胞悬液备用； 3. 效―靶细胞作用：在无菌操作条件下，取效应细胞和靶细胞各0.1ml（E/T=100:1），加入96孔培养板内，每份标本做3复孔。同时设自然释放对照孔（0.1ml靶细胞+0.1ml完全RPMI-1640培养液）和最大释放孔
实验 1． 在 96 孔圆底细胞培养板中加入 51 Cr 标记的靶细胞，每孔加 100 μ l 。 2． 向各孔加 100 μ l 效应细胞，效应细胞与靶细胞的比例（效靶比， E ： T ）根据要求而定，通常为 5 ： 1 ～ 20 ： 1 。阴性对照孔（自然释放）不加效应细胞只加 100 μ l 完全培养液，阳性对照孔（最大释放）中加 100 μ l 1 ％ NP40 （或 2 ％ SDS ， 1mol/L 盐酸）。每个实验置三个复孔。 3． 稍稍离心
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