PVDF膜/滤纸三明治，7x8.4cm，20张

Western Blot(免疫印迹法)步骤

,500- 1000μl/瓶) ，刮落细胞，转移到Ep管。注意：冰上操作。 4.超声 10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。 5.煮沸样品5 minutes。 6.离心12000g，5 min，取上清。 7.电泳分离：上样15μl~20μl 至 SDS-PAGE 胶 (10 cm x 10 cm)电泳。 如要定量检测某蛋白的表达水平， 应用RIPA裂解液(1 ml per 107 cells/100 mm dish/150cm2 flask)裂解

BIO-RAD（伯乐）电泳仪、电泳槽

使用者最大凝胶尺寸(W x L) 24 x 16 cm缓冲液要求200 ml凝胶容量≤3 块PROTEAN® II 凝胶三明治*3 块Criterion™ 凝胶4 块Mini-PROTEAN® 3 凝胶4 块Ready Gel® 预制胶 电源PowerPac™ HC 电源简介： 体积(W x L x H) 37 x 24 x 11 cm Sequi-Gen GT 测序电泳槽简介: 拥有专利* Sequi-Gen GT 测序电泳槽使测序胶的铺制和电泳变得更简单。系统设计避免

WB的经验总结

气泡；将漂洗好的凝胶准确平放在PVDF膜上，把凝胶的切角置于PVDF膜的切角标记上（注意膜的切角要大于凝胶的切角，以防止短路）；最后把3张滤纸放在凝胶的上面，做成凝胶三明治，剪去多余部分（胶、膜和滤纸务必一样大小），注意用赶走各层气泡。11将此三明治放入Bio-Rad半干转移仪中，注意检查PVDF膜在下，凝胶在上。12.根据凝胶面积按5mA/cm2,接通电源，电转时间70min。13.转移完毕，用丽春红染PVDF膜：PVDF膜首先用纯水漂洗，然后用1X丽春红染色，摇动5-10min)→见蛋白条带→