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- 库存:
99
- 细胞类型:
科研
- 物种来源:
鼠/人/其它
- 细胞形态:
上皮样/成纤维样/其它
- 运输方式:
常温运输/干冰运输
- 生长状态:
贴壁/悬浮
- 规格:
25T
细胞常规说明:
培养条件:89%基础培养基+10%FBS+1%双抗
冻存液成分:10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液
细胞质检情况:不含细菌、真菌、支原体等微生物污染
传代建议:1:2~1:3传代,2~3天换液1次
特别提醒:签收细胞后,如细胞状态不佳,或培养中遇到问题,烦请当天尽快联系,以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据,请务必重视。
悬浮细胞接收后的操作流程与注意事项
1.如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室
2.拧松瓶盖,细胞瓶竖立培养8h(或过夜)
3.待细胞沉底后吸除上层液体(含碎片残渣,请小心操作),然后吸取沉底的细胞层(2ML左右转移到新的培养瓶,加入新鲜的完全培养基(如细胞状态较差可将血清浓度调高到15%)继续培养
悬浮细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1.将培养瓶/皿中的细胞重悬混匀
2.吸取2/3或者一半混匀后的细胞悬液到新的培养瓶/皿
3.分别在原瓶/皿和新分瓶的培养瓶/皿加入等量或者2倍的新鲜培养基,使细胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
4.注意培养基PH值变化情况和细胞密度,定期半量换液(每周2-3次),待细胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重复1项操作或者冻存
贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项
1.收到细胞当天尽快更换新鲜完全培养基,第二天再进行消化处理
2.如果细胞收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养观察。同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基,培养观察
3.若出现生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养
贴壁细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1.吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加适量0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间)
2.镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml 完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散
3.取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养
4.注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项作或者冻存
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文献和实验tjmedwnn:确定G418最佳筛选浓度用什么细胞?大家好,我现在做实验,用G418抗性的逆转录病毒包装系统收获病毒液做稳定转染,第一步需要用PT67细胞包装收获病毒液,说明书上说质粒转入PT67细胞后要用G418做筛选,之前需要用不同浓度的G418做一个最佳筛选浓度试验。请教大家,用来做确定最佳浓度试验的PT67细胞是用未经过任何处理的PT67细胞呢还是用已经转染过的PT67细胞??另外收获病毒液后我需要用其转染干细胞,转染后同样需要用G418筛选,问题同上,首先做确定最佳G418浓度试验
问:构建逆转录病毒为载体的DNA(质粒),阳离子脂质体2000(过期的),转染病毒包装细胞pt67,G418筛选,在换液和传代过程中均会有细胞死亡(贴壁细胞漂浮)。求教原因。换液3.6ml DMEM+0.4ml新生牛血清+24μlG418传代用胰酶ph 7.2,1ml,用0.3ml新生牛血清中和,800rpm离心5min,弃上清,加入上述培养液。答:做一下G418浓度筛选,另外你的对照组未转染的细胞经同样浓度G418筛选后怎样呢?是否本来细胞状态不好?或是根本没有转进去呢?还有就是脂质
问:大家好,请问有人做过逆转录病毒包装吗,我最近在用PT67包装病毒,按照说明书上的要求,在细胞长到70%左右汇合时加入质粒和脂质体和无血清培养液培养4小时后更换为完全培养基继续培养24小时后加300μg/MLG418筛选,现在加药已经36个小时了,可是看细胞长的密密麻麻的大概有100%了吧,还不见细胞往下掉,我真是急死了,300μg/ml的筛选浓度是我在预实验里确定的应该错不了,可是为什么加药以后细胞还不死呢,说明书上说70%汇合时转染后还要继续培养24-36小时再加药,我知道这是要让抗性
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