细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒厂商

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细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒厂商是高品质的蛋白质研究，由北京百奥莱博供应，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒厂商
品牌：百奥莱博
规格：50T/200T
产地：国产|进口
编号：XH063
在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份，而研究得最多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白，不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位，而且很多时候分离出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究，例如EMSA(也称gelshift)，footprinting等。
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白与细胞浆蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒可以抽提50个样品，如果每个样品的数量为约二百万细胞或约60毫克组织。
包装清单：

储存条件：-20℃，有效期一年。
注意事项：
PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
本试剂盒对于组织样品，仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果很差。可以抽提的组织样品数通常不足100个。
使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 准备溶液：温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。取适当量的细胞核蛋白抽提试剂备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。(对于二百万Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为20微升或40毫克。)
5. 最高速剧烈Vortex 5秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长vortex时间。)
6. 冰浴10-15分钟。
7. 加入细胞浆蛋白抽提试剂B 10微升。最高速剧烈Vortex 5秒，冰浴1分钟。
8. 最高速剧烈Vortex 5秒，4℃ 12,000-16,000g离心5分钟。
9. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存。(千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。)
10. 对于沉淀，完全吸尽残余的上清，加入50微升添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂。(不吸尽上清会带来细胞浆蛋白的污染。)
11. 最高速剧烈Vortex 15-30秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔1-2分钟再高速剧烈Vortex 15-30秒，共30分钟。
12. 4℃ 12,000-16,000g离心10分钟。
13. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存。
14. 对于新鲜组织：
A. 把组织尽可能切成非常细小的碎片。按照20:1的比例混合适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A和B(例如200微升细胞浆蛋白抽提试剂A中加入10微升抽提试剂B)。并加入PMSF至最终浓度为1mM配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200微升组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液，并在玻璃匀浆器内充分匀浆。匀浆需在冰浴或4℃进行。
B. 匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，冰浴放置15分钟。
C. 4℃ 1,500g离心5分钟。把上清转移至一预冷的塑料管中，为抽提得到的部分细胞浆蛋白。(吸上清时千万不要触及沉淀。)
D. 对于沉淀，到了这一步已经充分匀浆，但很多细胞还没有破碎。接下去按照使用说明的步骤4开始操作，即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作，按照步骤4至步骤13抽提得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤14C中抽提得到的细胞浆蛋白合并。

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半二甲酚橙 Cellulose acetate layer sheets 19329-67-0
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25988-63-0 Poly-L-Lysine多聚-L-赖氨酸(3-7万)
PY02-355 玉米吐温-80琼脂 250克
BTN3080 植物RNAOUT Plant RNAOUT
D-丙氨酸甲酯盐酸盐 BCIG 14316-06-4
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9000-01-5 Gumacabic powder 阿拉伯树胶粉
曙红Y(醇溶) BNOA 15086-94-9
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BL0899 FITC标记羊抗兔IgG抗体
多聚右旋赖氨酸 DFIH 27964-99-4
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·PUC19
编号：XH030
规格：5ug(0.1 OD)
浓度
250～1,000μg/ml
贮存溶液
Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM
EDTA 1mM

产品说明
pUC19载体适合于DNA*(代"片")段的克隆、进行DNA测序、对外源基因进行表达等。由于在lacZ领域中含有多克隆位点，因此在以lacZ缺欠细胞作为宿主 (如：JM109等) 进行转化后，在含有IPTG、X-Gal 的平板培养基上进行培养时，可以很容易地通过兰白筛选，判断载体中有无DNA*(代"片")段的插入。同时还可以通过载体上的lac promoter表达外源基因，对插入载体中的DNA*(代"片")段进行测序等。进行DNA测序时，可以方便地使用M13系列的通用引物。
■ 链长
2,686 bp
■ 用途
1. DNA*(代"片")段的克隆。
2. 利用lac promoter进行基因表达。
3. 使用M13系列引物进行DNA测序。


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·FITC－羊抗猪IgG
编号：XH099
规格：0.5ml/5ml
荧光素标记抗体，是目前广泛用于免疫病理、细胞化学、流氏细胞学、病毒学及自身抗体的临床免疫诊断之中的特异、灵敏、定性和定位相结合的免疫化学试剂。
我们生产的荧光素标记羊抗猪IgG是将异硫氰酸荧光素（FITC，来源于SIGMA），经过常规方法标记在抗体羊抗猪IgG（来源于我公司自己纯化的抗体）分子上，经过过柱，透析，定量，加入稳定剂等，制成FITC－羊抗猪IgG。
储存条件：-20℃冻存。
浓度：抗体2mg/ml。
应用范围：FITC－羊抗猪IgG主要用于一抗来源于猪多抗（单抗也行）的后续实验。如免疫组化。

主要性能：
FITC为Sigma异构体I，最大吸收峰为495nm，最大发射峰为525nm。
工作液用0.01mol/L pH7.4PBS作1：5～1:20稀释使用，稀释过的抗体尽快用完，不要冻融。

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