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miRNAs表达调控 -- 5
miRNAs表达调控 -- 5’RACE克隆miRNA转录起始位点
达鹊生物
5’RLM-RACE利用帽子位点的特征,特性地扩增完整Ⅱ型启动子转录的RNA,确保正真起始位点的获得。pri-miRNA是细胞核内一种瞬时表达的转录本,能够很快被Drosha降解,达鹊生物技术人员经过反复摸索找到提高RACE灵敏度的方法,有效提高了5’ RLM-RACE的成功率。
“去帽法”5’RACE原理如下图所示:
服务优势:
★ 应用“去帽法”原理,可以有效的扩增cDNA 5’末端全长序列;
★ 采用巢式PCR法,提高了5’ RACE的灵敏度和特异性,对低丰度的基因或极少量的RNA样品同样可以进行5′RACE实验;
★ 采用扩增性能优越的反转录酶,使长片段的RT-PCR扩增成为可能;
★ 一次反应可研究多个基因。
服务流程:
★ 根据特定基因,进行序列分析,决定研究方案;
★ 抽提总RNA;
★ 已知序列验证:依据设计引物扩增,验证参考序列的存在及方向;
★ 5’RACE操作;
★ 对获取的序列进行测序验证(克隆到载体或PCR产物直接测序);
★ 分析结果,向客户提供完整的实验操作规程、实验报告、测序结果以及测序彩色峰图、引物、质粒以及含有该质粒的菌种等。
客户提供:
新鲜的组织或细胞材料,背景材料:RNA 来源、纯度、丰度、所扩增基因的估计长度、种属情况、是否具有同源序列等,已知部分的cDNA序列及方向。
我们提供:
插入待检5’端的质粒载体,测序报告以及实验报告。
质量保证:
正确的5’端转录起始位点位置。图2:miRNAs 5’RLM-RACE克隆成功率 图3:三种miRNAs转录本5’与3’端的克隆
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