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- 2025年07月14日
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4℃四个周；如长期保存，2X Direct PCR Mix 须-20℃；勿反复冻融超过3次。
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20
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上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
50T/100T
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
2）肺炎支原体荧光定量PCR检测试剂盒（染料法）普通PCR反应流程
3）反应原理
4）PCR循环
5）与荧光定量PCR技术相比较主要缺点。
肺炎支原体荧光定量PCR检测试剂盒（染料法）荧光PCR简述
定义：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化，通过仪器软件实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线实现对起始模板的定量分析。
荧光PCR检测分为两种方法：荧光探针法和荧光染料法。
荧光探针法检测原理：
荧光PCR如何实现实时监控的呢？
Ø PCR反应体系中加入荧光染料
Ø 所有的定量PCR仪器都有三个共同的组成部分（检测器、激发光源、热循环模块）
Ø 在扩增过程中，荧光信号随着PCR产物的增加而增强
Ø 每个循环结束后，定量PCR仪器通过光学系统记录荧光信号的增加
Ø PCR软件计算出数据，用于实验结果的分析
ARMS检测方法；1个SNP位点设计双管反应，含目的基因检测及内参检测双通道。
肺炎支原体荧光定量PCR检测试剂盒（染料法）技术特点：
Ø 准确可靠，临床双盲对照试验＞1000例，结果与金标准测序法比对，结果一致性大于99%。
Ø 高灵敏：可检测低至10ng的人基因组DNA。
Ø 快速：整个检测流程只需3小时。
Ø 简便：试剂盒提供预混好的试剂，使体系配置操作简便。
Ø 防污染
Ø 高特异性：双重特异性组成，保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对，才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对，在延伸中产生荧光。
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文献和实验做 real-time PCR之前，你应该如何着手设计引物？做哪些准备？看完必会！
过，你要先确定你选择哪个方法。如果你想用 Taqman Probe 法，请你选择 primer express 3.0。如果你想用 SYBR 法，我建议你选 primer premier 5.0。 为什么？请往下看。 3）两种引物设计软件之比较。 先说专门为 real-time PCR 定制的 primer express 3.0 。这个软件其实是为 Taqman 探针法设计的，而不适合SYBR染料法。 如果你用探针法，强烈推荐。打开软件就会发现，在方法选择的下拉菜单中
PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法利用了SYBR Green荧光染料非特异性与双链DNA结合并发光的特性，检测PCR的全部进程，从而判定初始RNA的量。 常用的miRNA第一链合成方法成熟的miRNA大小只有22nt左右，在用实时荧光定量PCR检测miRNA时，难点在于如何识别如此小的miRNA并合成第一链。目前常用的用于识别并合成miRNA第一链的方法主要有颈环法和加尾法两种。（1）颈环法原理图（2）加尾法原理图由于成熟miRNA较小，无法用常规的方法直接进行反转录、PCR
实时荧光定量PCR从1996年美国AppliedBiosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法
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