一个好的elisa试剂盒,不是靠广告,而是靠过硬的技术,稳定的质量,良好的口碑,完善的售后。信帆生物所销售的elisa试剂盒,几百篇文献引用,很多知名高校持续使用。欢迎来电咨询!
小鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被小鼠γ干扰素(IFN-γ)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
- 酶标仪(450nm)
- 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
- 37℃恒温箱
操作注意事项
- 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
- 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
- 预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。
- 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
- 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称 |
96孔配置 |
48孔配置 |
备注 |
微孔酶标板 |
12孔×8条 |
12孔×4条 |
无 |
标准品 |
0.3mL |
0.3mL |
无 |
样本稀释液 |
6mL |
3mL |
无 |
检测抗体-HRP |
10mL |
5mL |
无 |
20×洗涤缓冲液 |
25mL |
15mL |
按说明书进行稀释 |
底物A |
6mL |
3mL |
无 |
底物B |
6mL |
3mL |
无 |
终止液 |
6mL |
3mL |
无 |
封板膜 |
2张 |
2张 |
无 |
说明书 |
1份 |
1份 |
无 |
自封袋 |
1个 |
1个 |
无 |
注:标准品浓度依次为:800、400、200、100、50、0 pg/mL.
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
- 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
- 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步骤
- 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
- 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
- 待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;
- 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
- 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
- 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
- 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
- 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
- 灵敏度:最低检测浓度小于1.0 pg/mL。
- 检测范围:25 pg/mL - 800 pg/mL
- 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
- 重复性:板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。
- 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
- 有效期:6个月
免责声明
- 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
- 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
上海信帆生物在科研、中引进了一系列设备和仪器,为公司的迅速应用提供了便利条件,使达到优质高效,保证了产品的高质量。同时,公司严格遵守GMP管理的要求,从原料采购、、销售到售后服务,所有的活动均严格按照质检规程和岗位标准操作规程进行,并保留完整的记录。严格、规范的管理保证了公司产品质量稳定。
Elisa试剂盒操作注意事项:
1、实验室的环境要干净,防止空气中的一些细菌或粉尘对实验造成干扰。
2、一般的酶联免疫试剂盒中的酶标抗体是以辣根过氧化物酶(hrp)进行标记的。因此要求样本不能含(nan3),因为nan3是hrp的抑制剂。
3、如果样本是血清,应该充分离心,不得有颗粒。
4、试剂盒应在保质期内使用。不同批次的试剂盒中的溶液不得混用。
5、在进行酶联免疫实验之前,应该将试剂盒放置室温平衡30min以上。
6、稀释溶液时,应按照说明书的要求进行精确稀释。尽量选用去离子水或双蒸水进行稀释。
7、要正确使用移液器,吸取液体要精准,枪头上不得留有气泡。吸取不同的液体时,要注意更换枪头。
8、加样时要悬臂加样,避免枪头和孔内液体接触。
9、建议所有的样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。孵育时需将微孔用封板膜或保鲜膜封好,防止水分的蒸发。且封板膜不得重复使用。
10、底物显色剂为tmb,应避免与皮肤接触。终止液为2m浓硫酸,具有腐蚀性,应避免与皮肤接触。
ELISA实验中老师问题集锦:
☆★问:你好,我想请问一下你们销售的ELISA试剂盒用的酶标仪有没有什么特别限制,波长是多少?
☆★答:老师,你好!一般普通的酶标仪都可以的。用试剂盒的时候,酶标仪在 450nm 波长下测定即可。
☆★问:你好,我想问一下你们这个ELISA试剂盒的组成成分都有哪些,我拿了之后是直接检测吗,需要自己准备什么试剂吗?
☆★答:老师,你好。我们的试剂盒里面包括了酶标板,酶标试剂,标准品,显色液等所有试剂,老师不需要额外购买其他什么试剂盒,有酶标仪即可检测。
☆★问:你好,我想咨询一下,我的样本含有NaN3,你们说对结果会有影响,标本为什么不能含有NaN3?
☆★答:老师,你好,如果样本含有NaN3的话,是会有影响的,建议重新收集样本。因为NaN3抑制辣根过氧化物酶的活性。
☆★问:是否提供代测服务?
☆★答:购买我司ELISA试剂盒,可以提供免费代测服务。上海和南京地区的客户可以提供免费上门取样的服务,其他地方的老师可以把样本用EP管装好,编好号。放到泡沫箱子中,用干冰和冰袋寄送。我们是收到样本后7个工作日出实验报告。实验报告包括说明书,实验室用的仪器型号,数据,标曲等。
☆★问:你好,我想咨询一下你们的ELISA试剂盒在加样的时候有什么注意事项吗?
☆★答:老师,你好。我们加样的时候有几点是需要注意的,一是加样将样品加于酶标板孔底部,二是尽量不触及孔壁,然后轻轻晃动混匀。
☆★问:你好,我想知道你们的ELISA试剂盒操作的时候里面有一瓶浓缩液,这个浓缩液应该怎么稀释呢?
☆★答:老师,你好。我们96T的试剂盒里面是有配30倍浓缩洗涤液。我们在操作的时候用蒸馏水30倍稀释后使用。
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