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文献和实验。试剂公司在销售抗体时附有说明书,包括抗体的来源、免疫球蛋白的亚类、单抗或多抗、使用稀释度、使用流程和注意事项、洗涤时缓冲液的适宜离子强度和pH值等。市场销售的一抗分为即用型和浓缩型两种,对前者抗体的效价无需摸索,但对于浓缩型一抗,则应摸索出最佳的工作效价,抗体浓度过高或过低都将可能出现阴性结果,应该以一个适当的稀释度得到最佳的抗原染色强度和最低的背景着色。稀释特异性抗体常用含1%~3%非免疫血清的PBS,需现配现用,稀释后的一抗存放时间不可超过三天。 8.生物素标记第二抗体孵育 滴加稀释
关于凋亡的流式检测wanhood一、PI单染色法基本原理其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等,其中细胞核的改变最具特征性,主要包括以下几个方面:1.细胞核的改变:由于凋亡细胞核的改变,造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。研究表明,用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色,其DNA可染性降低。许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。2.光散射特性
值等。市场销售的一抗分为即用型和浓缩型两种,对前者抗体的效价无需摸索,但对于浓缩型一抗,则应摸索出最佳的工作效价,抗体浓度过高或过低都将可能出现阴性结果,应该以一个适当的稀释度得到最佳的抗原染色强度和最低的背景着色。稀释特异性抗体常用含1%~3%非免疫血清的PBS,需现配现用,稀释后的一抗存放时间不可超过三天。 8.生物素标记第二抗体孵育 滴加稀释度合适(按说明书推荐的稀释度或预实验摸索)的生物素标记二抗于切片上,室温孵育1小时,继而PBS漂洗3次,每次5分钟。二抗有抗鼠、抗兔
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