- ¥590
- 泽叶生物
- 中国/美国
- ZY100212-10
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
One-Tube Mutagenesis Kit
- 库存：
60
- 供应商：
泽叶生物
- 规格：
10次
基因的定点突变是重要的分子生物学技术，广泛用于载体构建、基因改造、蛋 白质功能研究等领域。但传统的方法需要使用单链DNA模板，而得到单链DNA模板 又需要先将基因克隆到类似M13这种载体中，操作过程冗长。为了克服这些缺点， 本公司将突变位点设计到一对互补的引物中，用高保真DNA聚合酶扩增质粒模板， 然后用Dpn I去除原始的甲基化模板，新合成的DNA通过互补形成带切口的双链质 粒，直接用于转化感受态细菌。
本产品具有下列特点：
1. 直接使用质粒DNA作为模板，免去了制备单链DNA的步骤。
2. 基于高保真PCR，对模板DNA序列没特殊要求，可以用于突变任何序列。同时 对模板的需求量很少。
3. 一管式，全部在一个优化的缓冲体系中完成，非常简单。
4. 使用Dpn I去除未突变模板，突变效率高达90%。
5. 不需要连接步骤，反应结束后可以直接转化。
6. 提供阳性对照质粒pUC19和突变引物，便于分析失败原因。
7. 可用于制备点突变，缺失突变和插入突变。
8. 使用于从dam+细菌中纯化的质粒（常用的宿主菌都是dam+），由于JM110 和SCS110为dam-，所以从中提取的质粒不能用本产品制备突变。
一管式点突变试剂盒使用及效果
将5-50 ng甲基化的模板质粒DNA用重叠引物扩增16-18次，然后加入1 μL Dpn I，37℃保温一小时去除残留的甲基化的模板DNA，然后直接转化感受态细胞。
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文献和实验条件，我一般设置 30 个循环。3. PCR 反应结束后，直接加入 Dpn I 限制性内切酶（待突变的质粒在细菌中会被甲基化修饰，因此，用 Dpn I 可以消化掉相应的模板质粒，而使突变质粒保留下来）及相应的 buffer，37℃ 酶切反应 1 h 左右 (也可相应的缩短或延长酶切反应时间)。4. 直接用 DNA 回收试剂盒进行胶回收，根据浓度，取 100ng 进行转化，涂平板。5. 第二天即可挑取单菌落送测序。6. 随后将测序正确的样品提质粒，即可进行后续相关实验。有没有觉得点突变很简单呢？如果你正在进行
woxingwosu 呵呵，如果是这么少的碱基需要去掉，我想直接用点突变的方法就可以了,类似于Stratagene公司的点突变试剂盒做法。 angellinang 对，用点突变的方法，overlap PCR ，先分别扩缺失片段的前后两段，再将这两段overlap融合就可以了。前一个片段的下游引物的5'端要引入后一个片段的5'端序列的反向互补序列。后一个片段的上游引物5'端要引入前一个片段3'端的部分序列。这两个引物刚好是反向互补序列。 xin
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