- ¥190 - 1980
- KALANG
- 中国大陆
- KL331
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2～8℃
- 保质期：
长期
- 英文名：
Zero Background Simple Cloning Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
10μl×20次|10μl×80次
零背景Simple克隆试剂盒/不含多克隆酶切位点MCS
英文名：Zero Background Simple Cloning Kit规格：10μl×20次|10μl×80次
编号：KL331
产品介绍：
本产品和传统的T4连接酶原理不同，它利用了Topoisomerase可以在瞬间（几秒钟-几分钟）、高效（接近100%）连接DNA*(代"片")段的原理采用本公司独创的工艺制成。
1. 可以在瞬间（几秒钟-几分钟）完成连接。
2. 无需冰浴和热休克，室温5分钟内完成转化；无需1小时复苏，只需37℃10分钟复苏便可以涂板。从连接到涂板只需15-20分钟。
3. 无自连、零背景，无需繁琐蓝白斑筛选，见到长出的克隆便是有插入的（接近100%）。
4. 可以连接长达10kb片段（即使连接5kb片段，挑10个菌落，至少8个是有插入的），是目前世界上最简单、最快速、零背景免筛选的TOPO TA克隆载体。
注：本TOPO载体连接体系是按照10ml计算，如果按照其它公司产品5ml计算，实际使用次数可以增加一倍，20次实际可用40次。
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文献和实验/穿梭质粒） 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使 G418（长那霉素衍生物）失活 （5）hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些酶切位点以外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选
（3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA
商品化的T载体有很多。本实验采用TaKaRa公司的pMDTM18-T Simple Vector。这个载体以pUC19载体为基础，消除了pUC18载体上的多克隆酶切位点，经EcoRⅤ酶切后在两侧的3＇端添上“T”制备而成（见附录1）。由于本载体上消除了多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。 【试剂与器材】
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