- ¥190 - 1980
- KALANG
- 中国大陆
- KL335
- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
12个月
- 英文名：
Zero Background TOPO-Blunt Cloning Kit (without MCS)
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20次|80次
平末端克隆试剂盒(不含多克隆位点)(拓扑连接酶技术)
英文名：Zero Background TOPO-Blunt Cloning Kit (without MCS)编号：KL335
规格：20次|80次
本试剂盒和传统的T4连接酶原理不同，它利用了拓扑异构酶可以在瞬间（几秒钟-几分钟）、高效（接近100%）连接DNA*(代"片")段的原理采用本公司独特的工艺制成。
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文献和实验按克隆的连接体系将这个小片段与你的载体（相应酶双切）连接转化…… 小片段连入的效率相当高，如果大家要检验：在菌长出来后，做PCR检验（人工合成的这个小片段的正链或反链与载体上的引物）。举个例子： 比如要在某载体的EcoR I和BamH I之间加一个新的MCS（EcoR V－Kpn I－Xho I－Hind III）（这几个位点必须在目的 载体上没有，如果有这个切点，你又实在想用的话，可以将目的载体用这个酶单切，绿豆芽核酸 酶/s1核酸酶平端化，再自连——位点封闭）： 1、合成 5‘－
1.0μlH2O 补至8.5μl30%PEG 8000 1~1.5μl（2）D、E和F管中加入： 10×连接缓冲液 1.0μl 5 mmol/L ATP 1.0μl H2O 补至8.5μl 30%PEG 8000 1~1.5μl 不加DNA 酶 6．连接反应体系置于16℃水浴温育过夜或20℃水浴温育4 h。 7．用每份稀释的连接产物转化感受态大肠杆菌。转化时，应
[原理] 利用DNA 连接酶把载体 DNA 和要克隆的目的 DNA 片段连接在一起，成为一个完整的重组分子，这就是分子克隆中常说的连接反应。当载体 DNA 和外源 DNA 末端都是由一种产生粘性末端的内切酶切割产生的话（同尾酶也可以），或者两者末端被接上一段互补的多聚体的尾巴，那么经退火后可形成新的重组分子。连接后产生的重组分子中仍然保留着外源 DNA 两端的限制性内切酶切点 ，从而使我们能方便地从重组分子再次取出所克隆的DNa段。 [操作] （1 ）取 3 支 eppendorf 离心
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