昆虫核蛋白/胞浆蛋白提取试剂盒

贝博® BBproExtra® 昆虫核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种昆虫细胞和各种昆虫实体组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞核膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。 如果下游应用是金属螯和层析等不能含EDTA试剂的实验，可以联系贝博更换不含EDTA的蛋白酶抑制剂混合物。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

细胞蛋白提取
1. 提取液准备：
每500ul蛋白提取液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
每500ul蛋白提取液B中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5-10×106个细胞中加入400μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置2-8℃条件振荡20-30分钟。
5. 然后在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，然后在4℃，10000×g条件下离心5分钟，弃上清。
8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡5秒。
9. 置2-8℃条件振荡30分钟，至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。
10. 在4℃，10000×g条件下离心5分钟。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

组织蛋白提取
1. 提取液制备：
每500ul蛋白提取液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
每500ul蛋白提取液B中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取适量昆虫组织样本，用手术剪刀尽可能剪碎，加冷PBS，用组织匀浆机/匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体，冰上静置3分钟，将匀浆液吸入另一预冷的干净离心管。
3. 在4℃，500×g条件下离心3分钟，弃上清。
4. 每20-50ul细胞压积（沉淀体积）中加入200μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置2-8℃条件振荡20-40分钟。
5. 然后在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，然后在4℃，10000×g条件下离心5分钟，弃上清。
8. 在沉淀中加入100-200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡5秒。
9. 置2-8℃条件振荡30分钟。
10. 在4℃，10000×g条件下离心5分钟。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。