酵母质膜蛋白提取试剂盒

跨膜蛋白承担各种生物功能，膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。 贝博® BBproExtra® 酵母膜蛋白提取试剂盒是一种高效的高产膜蛋白提取试剂盒，酵母膜蛋白提取试剂盒可以从各种酵母样本中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解酵母总膜组份，包括质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

 

1. 提取液制备：
每500ul酵母蛋白提取液B中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取适量酵母培养物，在4℃，2000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
3. 用冷PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每100-200ul体积酵母沉淀物中加入500ul酵母质膜蛋白提取液A，混匀后，在室温或37℃条件下轻轻振荡30分钟-1小时。
5. 在4℃，2000g条件下离心5-10分钟，移除上清，收集沉淀。
6. 在沉淀物中加入500ul冷的（4℃）酵母质膜蛋白提取液B，混匀。
7. 在2-8℃条件下轻轻振荡15-45分钟。
8. 将提取液在4℃条件下12000×g离心5分钟，取上清。
9. 将上清在37℃水浴10分钟。
10. 在37℃ 1000×g离心3分钟。
11. 此时溶液分为2层，小心移除上层部分，留下管底部下层部分大约30-50ul液体。
12. 用50-100ul膜蛋白溶解液C溶解该下层溶液，即得酵母质膜蛋白样品。
13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。