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- KALANG
- 中国大陆
- KL81201
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温
- 保质期：
一年
- 英文名：
Yeast Electro Competent Cell Preparation Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20次
酵母电转感受态细胞制备试剂盒
规格：20次英文名：Yeast Electro Competent Cell Preparation Kit
产品简介:
本酵母电转感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理,高效快速制备酵母电转感受态细胞,用于长期冻存以备后续转化的产品,它具有下列特点:
1.一次制备,-80℃保存,多次使用。
2.操作简单,单溶液制备,除酵母培养的时间外,整个操作只需要10分钟。
3.试剂盒含高效转化液,即开即用。
4.得到的感受态细胞的最高转化效率在0.2-1×105个转化子/μg质粒DNA。
5.适用于各种实验用酵母菌株,包括S.cerevisiae、C.albicans、S.pombe、Pichia pastoris 等。也可用于携带有选择性质粒的酵母。
6.得到的感受态细胞可即刻转化各种线性或环状酵母穿梭质粒,例如YIp,YRp,YCp,YEp和YAC等。
7.可以用于定点突变(Site－Directed Mutagenesis)、基因破坏(GeneDisruption)、等位突变基因修复(Mutant Allele Recovery)、酵母双杂交系统等实验。
使用及效果:
将一个酵母菌落接种到10 mL的YPAD培养基中,30℃摇晃培养直到OD600达到0.6-1.0,离心弃上清后再用5 mL溶液A洗涤,再用2 mL溶液A将菌体重悬,然后按每管100 μL分装,放-80℃保存。
运输及保存:
常温,有效期一年。
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文献和实验，不能得到足够的菌量来抽提质粒，摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型，导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多：容易导致裂解不充分，且容易超过硅胶膜柱的承载上限，最终使得质粒提取效率降低，建议参考提取试剂盒建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当：比如在加入缓冲液重悬菌体时，菌体没有充分分散悬浮，导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解，可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂（QIAGEN 质粒提取试剂盒中均有配备 LyseBlue 指示剂），均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用
浮于200ul 0.1MCaCl2中, 冰浴30min 建议用TSS法，简单方便，比氯化钙法的转化效率高.别的菌可能不一定适用。 方法五 E.coli感受态细胞制备方法: 单菌落平板至2ml LB, 37℃ 250 r/m, 1ml 转至50 ml LB, 37oC 250 r/m至 A600=0.2-0.4 离心后用10毫升TSS重悬后,分装 -70oC保存。尽量冰上操作. 转化: 加质粒( TSS: 7.0ml pH6.1 LB 2.0ml 50% PEG
sample + - 10*T4 buffer 1.00μl 1.00μl 1.00μl PGEM-T (50ng/ul) 1.00μl 1.00μl 1.00μl 目的基因(150ng/ul) 1.00μl 1.00μl / T4 连接酶 0.50μl 0.50μl 0.50μl 补水 6.50μl 6.50μl 7.50μl 于16℃连接过夜。或室温(25℃)1 小时以上。 2.5 感受态细胞制备及转化 2.5.1 CaCl2 制备感受态细胞(DH5α 、DH
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