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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温运输,-20℃保存
- 保质期:
二年
- 英文名:
Blue-White Vector T
- 库存:
60
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
50 ng
T载体是克隆PCR扩增产物必不可少的工具,但是由于市场上的各种T载体质量参 差不齐,用户很难购买到满意的产品;同时购买的T载体为线性DNA,不能保种,必 须反复购买,累计成本很高。为解决这一问题,天恩泽特推出一站式T载体制备试剂套 装,它含有除限制性内切酶以外的、制备T载体所需要的所有试剂,包括可以在转化宿 主细菌后永久保存的环形T载体质粒DNA。用户可以在方便的时候自己制备高质量的T 载体,再也不必因为T载体质量不好而烦恼。
1. 一次购买,终身拥有。本产品提供制备T载体用的环形质粒DNA,可以象其他质粒 一样保种并长期保存。需要时随时制备,十分方便。
2. 一站式自助型。本产品含有转化试剂,质粒DNA制备试剂和胶回收试剂,用户 只需要提供XcmI限制性内切酶和基本分子生物学实验条件,就可以自己制备T载 体。整个过程只需要两天。
3. T载体含T率为100%。本产品不是使用Taq DNA聚合酶或TdT加尾法制备T载体, 而是使用XcmI酶切法。质粒的多克隆位点上预先插入了一段位点经过精心设计的 片段,用XcmI酶将此1.3 Kb片段切除后将得到两端都是T突出的载体DNA(即T 载体),所以含T率远高于用其它方法得到的T载体。
4. 方便各种下游操作。用本产品得到的克必隆蓝白T载体插入位点两侧有多种常见的 酶切位点,便于后续克隆。
5. XcmI位点在a互补区,可以使用蓝白斑筛选重组子;两边还有T7和SP6 RNA聚合 酶启动子,便于制备RNA探针。
可保种型蓝白T载体使用及效果
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文献和实验细菌不能利用arginine。 F’ 一个低拷贝可移动的质粒,当被M13噬菌体侵染时,可产生单链DNA。 LacI 编码lac抑制子,用于蓝白斑筛选时需加入IPTG,才可启动表达β-gal。 dam/dcm 消除了内源腺苷和鸟苷的甲基化。在此种细菌中繁殖的DNA不被甲基化 附:关于大肠杆菌 http://www.dxy.cn/bbs/thread/4335511 关于T载体 http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1286939_1.html
控制 所有质量控制鉴定结果都公布在随酶提供的技术数据卡上。 非特异性内切酶鉴定 为鉴定非特异性内切酶污染,限制性内切酶与缺少该酶识别序列的超螺旋DNA底物温育。对于RF I型DNA(超螺旋形式),一个单一的非特异性缺口就会将它转变成RF II型DNA(带缺口环状)。小份的限制性内切酶与1μgDNA在50μl反应体系中,采用推荐的NEBuffer,在推荐的温度下温育4小时。两种形式的DNA在琼脂 糖凝胶上很容易区分,可以计算出从RF I 到 RF II的转化
的商业性试剂盒,它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3’末端加上一个非模板依赖的A,而T载体是一种带有3’T突出端的载体,在连接酶作用下,可以快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆 位点(MCS)中。2.操作步骤⑴ 连接反应一般在灭菌的0.5ml离心管中进行。⑵ 10μl体积反应体系如下:①取T载体1μl (50ng),加入等摩尔数PCR 产物 。②加入含ATP的10×Buffer 1μl,T4 DNA连接酶合适单位,用ddH2O 补足至10
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