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文献和实验细菌不能利用arginine。 F’ 一个低拷贝可移动的质粒,当被M13噬菌体侵染时,可产生单链DNA。 LacI 编码lac抑制子,用于蓝白斑筛选时需加入IPTG,才可启动表达β-gal。 dam/dcm 消除了内源腺苷和鸟苷的甲基化。在此种细菌中繁殖的DNA不被甲基化 附:关于大肠杆菌 http://www.dxy.cn/bbs/thread/4335511 关于T载体 http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1286939_1.html
控制 所有质量控制鉴定结果都公布在随酶提供的技术数据卡上。 非特异性内切酶鉴定 为鉴定非特异性内切酶污染,限制性内切酶与缺少该酶识别序列的超螺旋DNA底物温育。对于RF I型DNA(超螺旋形式),一个单一的非特异性缺口就会将它转变成RF II型DNA(带缺口环状)。小份的限制性内切酶与1μgDNA在50μl反应体系中,采用推荐的NEBuffer,在推荐的温度下温育4小时。两种形式的DNA在琼脂 糖凝胶上很容易区分,可以计算出从RF I 到 RF II的转化
的商业性试剂盒,它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3’末端加上一个非模板依赖的A,而T载体是一种带有3’T突出端的载体,在连接酶作用下,可以快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆 位点(MCS)中。2.操作步骤⑴ 连接反应一般在灭菌的0.5ml离心管中进行。⑵ 10μl体积反应体系如下:①取T载体1μl (50ng),加入等摩尔数PCR 产物 。②加入含ATP的10×Buffer 1μl,T4 DNA连接酶合适单位,用ddH2O 补足至10
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