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- 2025年07月14日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 保质期：
二年
- 英文名：
Magic Vector G
- 库存：
60
- 供应商：
泽叶生物
- 规格：
2 μg
本产品是高效零背景通用（General）克隆载体，其无背景克隆原理是该载体 携带一自杀基因，多克隆位点在该基因之中，自身环化的载体其自杀基因正常表 达，转化细胞不能生长。只有当外源DNA插入片段打断该自杀基因的正常编码顺 序，转化细胞才能生长，所以最后得到的转化子几乎都是含有插入片段的重组子。
1. 零背景，阳性率一般为95%，不用蓝/白筛选，尤其适合于构建文库用。
2. 适用于绝大部分常用的E.coli菌株，而市场上的同类产品一般都需要特殊的菌株 作宿主。
3. 克隆步骤简化，可一小时内即可完成。载体无需完全酶切，无需去磷酸化，无 需要纯化片段。
4. 多拷贝复制起始位点（ori），便于大量制备质粒。
5. 质粒用量仅为常规方法的1/5。
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文献和实验注意的是，Illumina测序仪使用的桥式PCR与传统的桥式PCR有所不同，它会交替使用Bst 聚合酶 进行延伸反应以及使用甲酰胺（formamide）进行变性反应。这样，经过桥式PCR扩增之后，也会在固相载 体上形成一个个的模板“克隆”。一块芯片的8条独立“泳道”上每一条泳道都可以容纳数百万的模板“克 隆”，这样一次就可以同时对8个不同的文库进行测序。 经过上述PCR扩增步骤之后，所有的模板都被线性化处理（linearization）而形成单链模板，接着与测 序引物退火、杂交。随后使用修饰的DNA聚合酶和四
8g（湿重），以100ml 1mol/LNaCl和100ml 蒸馏 水先后在漏斗上洗涤，抽干后移至小三角瓶内，加入6.5ml 2mol/L NaOH、1.5ml 环氧氯丙烷、15ml 56% 1，4－二氧六环，于40℃的恒温摇床中振摇活化2h后取出，在烧结漏斗中以 蒸馏 水和0.2mol/L，pH9.5 Na 2 CO 3 -NaHCO 3 缓冲液洗涤、抽干。 3．模拟过氧化物酶与载体的连接 将10ml 牛
对载体再说。 再回答几个容易混淆的问题 慢病毒感染效率低第一步查什么？先查病毒滴度和你算的 MOI 是否合理，再排查细胞状态和检测方法。 Polybrene 有毒吗？有，部分敏感细胞会被它毒死，可换 HitransG A/P 类低毒助染剂。 离心感染怎么操作？加病毒和助染剂后 1000g 左右离心约 1.5 小时，提升大体积/低滴度感染。 荧光弱就是失败吗？不一定，目的基因长或融合表达都会让荧光偏淡，用药筛或 qPCR 复核。 原代/悬浮细胞慢病毒染不上怎么办？常规体系对这类细胞天生弱，建议换针
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