- ¥997
- 泽叶生物
- 中国/美国
- ZY90603-5
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
Random Primer DNA Labeling Kit
- 库存：
60
- 供应商：
泽叶生物
- 规格：
5次
本产品是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即 用型DNA探针标记试剂盒，标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结 合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸 三步组成本产品在上述原理的基础上本产品的特点是：
1. 使用十聚引物，复性效率比六聚引物更高。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解。
3. 快速，最快1小时即可完成标记反应。
4. 所得DNA探针比活性高(对同位素可以达到109 cpm/ μg DNA)，检测灵敏度 高。
5. 所需模板DNA量少（只需要10 ng以上即可），DNA可以是各种形状（线状和 环状）的、也可以是单链或双链的，长度在100 bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400 nt之间，可以用于Southern杂交、Northern杂 交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 三种标记选择，其中90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标 记，但需自备标记底物；90603B和90603C可分别用于生物素和标记。
随机引物法DNA探针标记试剂盒使用及效果
将10ng-3 μg的DNA模板在水（终体积不超过14 μL）中变性5分钟后放冰上， 加入2 μL 10×标记缓冲液、1 μL Klenow exo-酶、1 μL 标记核苷酸（A型中不提 供），混合后37℃保温1-20小时，加入1 μL自备的0.5M EDTA终止反应。所得标 记探针可以直接使用或者放-20℃长期保存。
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文献和实验随机引物法探针标记 随机引物法的原理是使被称为随机引物(random primer)的长6个核苷酸的寡核苷酸片段与单链DNA或变性的双链DNA随机互补结合(退火)，以提供3， 羟基端，在无5， →3， 外切酶活性的DNA聚合酶大片段(如Klenow片段)作用下，在引物的3， 羟基末端逐个加上核苷酸直至下一个引物。当反应液中含有标记的核苷酸时，即形成标记的DNA探针。6个核苷酸混合物出现所有可能结合序列，引物与模板的结合以一种随机的方式发生，标记均匀跨越DNA全长。当以RNA
缺口平移法探针标记 探针的标记方法很多，大致可以分为两大类：引入法和化学修饰法。引入法是运用标记好的核苷酸来合成探针，即先将标记物与核苷酸结合，然后通过DNA聚合酶、RNA聚合酶及末端转移酶等将标记的核苷酸整合入DNA或RNA探针序列中去。化学修饰法即采用化学方法将标记物掺入已合成的探针分子中去，或改变探针原有的结构，使之产生特定的化学基团。引人法较化学修饰法更常用．按其整合的方法不同?引入法可分为缺口平移法、随机引物法、末端标记法和PCR扩增标记法和RNA体外转录法等。 缺口
非常高，一般情况下同位素是首选。如今Atlas SpotLight标记试剂盒特别提供逆转录所需的试剂，可以将2μg以上的mRNA或者50μg以上的RNA样品制备成生物素标记的单链cDNA探针，由于没有竞争性抑制，单链探针的灵敏度要大大高于双链探针。另外生物素标记的探针比32P标记的探针要稳定，可以在半年内多次重复使用。 对于Southern、Northern和多组织Northern预制杂交膜（MTN）、多组织表达矩阵（MTE）等以尼龙膜为基质的杂交、印迹反应，可以选用SpotLight随机引物标记试剂盒
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