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大量
- 供应商:
康朗生物
- 规格:
25μl反应×100次
GoldStar TaqMan探针一步法荧光定量PCR试剂盒(With ROX)
编号:KL054规格:25μl反应×100次
产品介绍:
本产品是采用探针法(TaqMan,Molecular Beacon等)进行一步法Real-Time RT-qPCR的专用试剂盒。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应时,逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行,反应过程中无需添加试剂,无需打开管盖,避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高,荧光信号强,信噪比高,非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA聚合酶同时发挥最大功效,提高反应效率;所含的ROX染料可校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,适用于以ROX作为校正染料的定量PCR仪。使用本产品可以得到更宽广的线性范围,对目的基因定量更准确,重复性好,可信度高。
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文献和实验比,其计算公式是。 绝对定量的数据易于理解,但是绝对标准品的制备和测定其DNA含量比较困难。有许多商业性的标准品试剂盒供选购,可以解决这种困难。 相对定量的标准品容易在实验室里自己制备,但是数据处理比较麻烦,对实验数据的解释有一定难度。13. 定量PCR基因表达的实验数据应该如何处理? 总的来说,有三个层次的校正是必须要做的。 首先,参比信号校正。试剂中必须包含固定浓度的ROX,这样由于反应总体积的差异、所在孔的位置不同、试管壁的厚度差异、管盖透光性能的差异等所引起的荧光信号波动都能够被扣
还会有逆转录酶——这里有个一步法和两步法的区别,一般而言两步法较灵活,一次cDNA反应可以进行多次PCR反应,而一步法就相对简单快速。ABI有个通用型的一步法试剂盒(Universal PCR Master Mix),这个试剂盒其实也就是Core Reagents试剂盒的成份,但是已经预混合起来的,并且在此基础上加入了一些额外的成份帮助完成简单高效的Taqman探针定量PCR反应,反响不错,甚至对于一些“刻薄”的G/C富集的模板也得到了相当不错的结果。 Qiagen的Quantitect
也可能会导致CT值差别比较大。 当斜率为4的时候,扩增效率是77.8%,斜率大于4的话,效率继续下降。 扩增效率的问题实际就是引物的扩增效率,可能酶活的关系没有那么重要,前提是试剂盒的质量有保证。回到扩增效率,只有在引物和模板处于最适比例时才能得到比较满意的扩增效率,因此通过调节PCR反应体系中的引物终浓度来解决,可以做一些引物梯度来比较。 5. ROX染料是什么作用? ROX的作用ABI宣称是用来校准加样误差的。 但是据说ROX的作用实际
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