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- KALANG
- 中国大陆
- KL038
- 2025年07月16日
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大量
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康朗生物
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25次|100次
HiFi-MMLV逆转录酶
编号：KL038规格：25次|100次
产品介绍:
HiFi-MMLV是经过突变的M-MLV基因利用大肠杆菌工程菌进行重组与表达的逆转录酶,该酶能够催化以RNA或DNA:RNA杂交链为模板的互补DNA聚合反应。经过突变的HiFi- MMLV逆转录酶RNase H活性缺失,减少了逆转录反应中RNA的降解,更容易获得全长的cDNA。HiFi-MMLV逆转录酶耐热性及稳定性强,可以合成最大7kb的cDNA,cDNA产量高。适用于第一链cDNA的合成、RT-PCR、RT-qPCR以及全长cDNA文库的构建等。
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文献和实验的编码和长非编码 RNA）、测定基因表达、发现剪接变异和融合转录物以及检测低丰度基因的的高通量方法。与基因芯片相比，RNA-Seq 的优点包括动态范围更大、灵敏度更高以及可在无基因组信息的情况下表征 RNA 序列。 逆转录酶的保真度可能在 RNA 测序等序列准确度至关重要的情况下发挥重要作用。逆转录酶的保真度指的是 RNA 逆转录为 DNA 过程中的序列精确度。保真度与逆转录错误率成反比。据报道，基于 MMLV 的逆转录酶错误率在合成 15,000 到 27,000 个核苷酸中有一个错误核苷
糖凝胶电泳，若胶图上只有 28sRNA、18sRNA 和 5.8sRNA 三条单一的条带，说明提取的 RNA 完整度良好。如果出现拖带的现象，表示 RNA 部分降解。2、若胶孔和 28sRNA 条带之间出现单一明亮的条带，表示可能有基因组 DNA 残留。3、若胶孔内出现条带，说明可能有蛋白等大分子物质残留。逆转录RNA 提取完成后，需要反转成 cDNA 才能进行后续实验，所以反转步骤是必不可少的。逆转录将从逆转录酶的选择和引物的选择进行介绍：逆转录酶的选择：常见代表性反转录酶有 AMV RTase 和 MMLV
合酶活性相互竞争RNA模板与DNA引物或cDNA延伸链间形成的杂合链，并降解RNA：DNA复合物中的RNA链。被RNaseH活性所降解的RNA模板不能再作为合成cDNA的有效底物，降低了cDNA合成的产量和长度。因此消除或大大降低逆转录酶的RNaseH活性将会大有裨益。SuperScriptⅡ逆转录酶，RNaseH- 的MMLV逆转录酶及ThermoScript逆转录酶，RNaseH- 的 AMV，比MMLV和AMV得到更多量和更多全长的cDNA（图3）。RT-PCR灵敏度会受cDNA合成量的影响
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