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- KALANG
- 中国大陆
- KL190
- 2025年07月15日
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-20℃
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6个月
- 英文名：
miRNA fluorescent quantitative PCR detection kit
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50μl×50次
miRNA荧光定量PCR检测试剂盒
规格：50μl×50次英文名：miRNA fluorescent quantitative PCR detection kit
编号：KL190
本试剂盒采用SYBR Green I 嵌合荧光法的原理进行miRNA 荧光定量检测。本试剂盒包含miRNA 荧光定量检测的所有试剂，包括2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。2×miRNA qPCR Mix（含Sybr Green）是专门为miRNA 定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR 检测试剂，其中的DNA polymerase 采用的是抗体修饰的热启动形式， 配合特殊的Buffer 体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内进行准确定量。（该试剂盒须与miRNA对应cDNA第一链合成试剂盒（ALH189）配套使用。）
试剂盒组分(25次)：
2 x miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)———————1.25 ml
Reverse primer(10μM)——————————————55μl
需自备的试剂：
1. 分子生物学实验级别的水（无核酸酶）
2. 待检测miRNA对应的qPCR上游引物（Forward primer）
Forward Primer设计原则：
1. 遵循引物设计的最普遍原则。
2. 以成熟的miRNA 序列为基础，将U替换成T，这是最基础和最简单的设计方法。
3. 试剂盒中提供的下游引物的Tm 值为65℃，设计上游引物的Tm 值要尽量保证在65℃左右。
4. 若按照原则2 的方式直接设计的引物其Tm 值过低，可以在引物的5’端添加几个碱基（最好为G或C碱基）；也可以在’3端添加1 个或几个A 碱基；或者5’端和3’端同时修饰。
5. 若按照原则2 的方式直接设计的引物其Tm 值过高，可以在引物的5’或3’端去掉几个碱基。
注意事项：
1. miRNA 第一链cDNA 的加入量不要超过real time PCR 体积1/10。
2. 对于特殊的检测体系中，高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增，根据所检测miRNA 的丰度适当的稀释cDNA（10倍或者100倍）。
3. 本品中含有荧光染料Sybr Green，I保存本品或配制PCR 反应液时应避免强光照射。
4. 2×miRNA qPCR Mix不含参比染料ROX，客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
储存条件：-20℃，有效期6个月。
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文献和实验。由于 miRNAs 可以对不完全互补的 mRNA 配对来抑制蛋白质的翻译过程，因而每个 miRNA 可以有多个靶基因，而几个 miRNAs 可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个 miRNA 来经济地调控多个基因的表达，也可以通过几个 miRNAs 的组合来精细调控某个基因的表达 。 对于基于 miRNA 调控基因表达的研究的逐步深入，将帮助我们理解高等真核生物的基因组的复杂性和复杂的基因表达调控网络。miRNA荧光定量PCR基本原理 实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中
利用了SYBRGreen荧光染料非特异性与双链DNA结合并发光的特性，检测PCR的全部进程，从而判定初始RNA的量。 常用的miRNA第一链合成方法 成熟的miRNA大小只有22 nt左右，在用实时荧光定量PCR检测miRNA时，难点在于如何识别如此小的miRNA并合成第一链。目前常用的用于识别并合成miRNA第一链的方法主要有颈环法和加尾法两种。 （1）颈环法原理图 （2）加尾法原理图 由于成熟miRNA较小，无法用常规的方法直接
miRNA实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR从1996年美国Applied Biosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个
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