His标签蛋白纯化预装柱 蛋白质研究

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北京百奥莱博专业生产销售His标签蛋白纯化预装柱 蛋白质研究，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：His标签蛋白纯化预装柱 蛋白质研究
规格：5ml|1ml
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML
Ni-NTA Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni2+）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。此外，因其基质的耐压性（该基质可以耐受最高0.3 MPa的压力），该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化，可在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。

Ni-NTA 6FF Chromatography Column是一种以Ni-NTA Agarose Resin 6FF为填料的中压预装柱，该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户用于纯化His-tag蛋白。

基质（Matrix）：高度交联的6%琼脂糖凝胶
孔径（Bead size）：45-165µm
载量（Capacity）：＞40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压（Tolerance Pressuremax）：0.3MPa, 3bar
储存缓冲液：含20%乙醇的1×PBS
柱子尺寸（Column Size）：0.7×2.5cm（1ml）
储存条件：4℃保存，有效期2年

注意事项
1）建议纯化所用缓冲液和蛋白溶液经0.22µm或0.45µm滤膜过滤后上柱使用。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法
（一）纯化流程

1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理：低咪唑上样，高咪唑洗脱，或者高pH上样，低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。可溶性组氨酸标签蛋白纯化所需配方详见附表1。包涵体组氨酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2。

2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白（本说明以细菌表达蛋白为例）
1）挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中，根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2）表达结束后，将培养液转至离心瓶，7000rpm，离心15min，收集菌体，然后加入1/10体积的裂解液（Lysis buffer）和PMSF（PMSF在破碎前加入，其终浓度为1mM），同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3）之后加入溶菌酶，使其工作浓度为1mg/ml。【注】：如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。
4）将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，可考虑加入10µg/ml RNase A和5µg/ml DNase I），混匀，置于冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。
5）收集上述澄清蛋白液，10000rpm，4℃离心20-30min。取上清，0.22µm/0.45µm滤膜过滤后，置于冰上备用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白
将细胞培养液转移至离心瓶，5000rpm离心10min，收集上清。如上清中不含EDTA、组氨酸和还原剂等，即可直接上柱纯化；如含有EDTA、组氨酸和还原剂等物质，则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】：对于大量体积的上清，需加入硫酸铵进行沉淀浓缩，之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵体蛋白纯化（以细菌为例）
1）将培养液转移至离心瓶，7000rpm，离心15min，收集菌体去上清。
2）按照菌体：裂解液=1:10（w/v）的比例将菌体充分悬浮，混匀，冰浴超声破碎。
3）将破碎液转移至离心管，10000rpm，4℃离心20-30min，去上清。可重复步骤2）和3）一次。
4）按照菌体：裂解液（含8M尿素）=1:10（w/v）的比例将包涵体充分悬浮。
5）变性条件下纯化His标签蛋白纯化。

3 样品纯化（以AKTA使用为例）
1）将泵管道注满去离子水。去掉产品上塞，连接至色谱系统中，再折断下口，将预装柱连接到色谱系统中，注意旋紧。
2）3-5倍柱体积去离子水冲洗出存储缓冲液。
3）至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。推荐流速为5ml/min。
4）利用泵或注射器上样。【注】：若样品粘度增加，即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压；上样量不要超过柱子的结合能力；大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）Wash Buffer 平衡柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。【注】：在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6）Elution Buffer一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
7）建议用更高浓度咪唑（如500mM）彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。随后依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂，最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

4 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

（二）在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5Mpa）或者填料上面出现明显的污染时，需对其进行在位清洗（Cleaning-in-Place，CIP）。在位清洗时，先把Ni2+脱掉，清洗结束后，将填料保存在20%乙醇中，后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物，如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。
1 去除强疏水结合的蛋白，脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积，接触时间为15-20min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1M醋酸溶液，接触时间为1-2h。去污剂处理后，需用70%的乙醇清洗5倍柱体积，彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。
2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接触10-15min，之后用去离子水清洗10倍柱体积。

（三）填料再生
当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5Mpa），填料上面出现明显的污染，或填料载量明显变低时，需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理，即填料再生。按照下面操作流程进行：
1）使用0.2M 醋酸溶液（含6M GuHCl）清洗2倍柱体积；
2）去离子水清洗5倍柱体积；
3）2%SDS清洗3倍柱体积；
4）去离子水清洗5倍柱体积；
5）乙醇清洗5倍柱体积；
6）去离子水清洗5倍柱体积；
7）100mM EDTA（pH 8.0）清洗5倍柱体积；
8）去离子水清洗5倍柱体积；
9）100mM NiSO4清洗5倍柱体积；
10）去离子水清洗10倍柱体积。

填料再生后，可立即使用，也可保存在20%乙醇中，置于4℃备用。

更多有关His标签蛋白纯化预装柱 蛋白质研究的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：
胆固醇酯酶 Span 85 9026-00-0
PY08-036 乳糖发酵管(带导管) 10ml 10支/盒，用于大肠菌群的确证试验
苯甲脒 L-Tryptophan 618-39-3
ARB13956 猪热休克蛋白20(HSP-20)含量测试 Porcine heat shock protein 20,hsp-20 ELISA KIT
ARB12518 大鼠热休克蛋白40(HSP-40)血清中含量检测 Rat heat shock protein 40,hsp-40 ELISA KIT
ARB12975 小鼠多巴胺D1受体(D1R)Elisa分析 Mouse dopamine d1 receptor,d1r ELISA KIT
氨基琼脂糖凝胶4B Veratryl alcohol
BL0929 RBITC标记羊抗马IgG抗体
12771-68-5 环丙嘧啶醇 Ancymidol
T7 DNA聚合酶 TTAB
ARB11668 人维生素D(VD)含量检测 Human vitamin d,vd ELISA KIT
PY02-311 CVT琼脂 250克
BL0645 丁基-琼脂糖凝胶H.P Butyl -Sepharose H.P
5-氮胞苷 DL-Lysine monohydrochloride 320-67-2
HC0034 Transwll 聚碳酸酯膜嵌套0.4um
间羟基联苯 Josamycin 580-51-8
磷酸氢氨钠 Alizarin yellow GG 13011-54-6
ARB12803 小鼠β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)酶标法分析 Mouse β-glucuronidase,βgd ELISA KIT
ARB12211 大鼠成纤维细胞生长因子10(FGF-10)定量分析 Rat fibroblast growth factor-10,fgf-10 ELISA KIT
ARB11264 人骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)酶免分析 Human bone morphogenetic protein receptor 1a,bmpr-1a ELISA KIT
His标签蛋白纯化预装柱 蛋白质研究关键词：SY0394,Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML,His标签蛋白纯化预装柱


·红色荧光标记人源低密度脂蛋白
编号：SY0446
英文名称：Human DiI-LDL
规格：500μg
红色荧光标记人源低密度脂蛋白（Human DiI-LDL）是标记荧光探针Dil（1,1-dioctadecyl-3,3,3,3- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate）的LDL，可以用来观察培养细胞的LDL结合位点，或筛选LDL受体表达缺陷型细胞突变株。也可以通过流式细胞术评估细胞受体水平，或检测组织内的受体水平。 DiI-LDL是研究细胞内吞作用非常好的标记物。

低密度脂蛋白（Low Density Lipoprotein，简称为LDL）是通过脂蛋白酯酶的水解作用，脱去极低密度脂蛋白（VLDL）中的甘油三脂，释放游离脂肪酸转化而来的。因甘油三酯的去除使得胆固醇所占比例提高，增加颗粒本身密度，从而得到LDL。LDL与脊椎细胞表面的受体特异性结合，然后通过受体介导的内吞作用将胆固醇运输到全身各处细胞。因此，LDL可以用来研究受体介导的内吞作用过程，尤其是在动脉粥样硬化等疾病中，血浆来源的LDL还可用于研究LDL在功能和代谢中的氧化作用。

我司提供的Human DiI-LDL为无菌包装，可以直接稀释使用。除提供DiI-LDL，我们还提供不带标记的LDL，以及修饰化的LDL如乙酰化LDL（Ac-LDL），以及氧化修饰的LDL（Ox-LDL）。

制备方法
纯化的人健康血浆来源的LDL直接标记上DiI荧光探针，然后通过超速离心以及透析的方法纯化回收标记产物，并滤膜过滤除菌。纯化的DiI-LDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS，pH 7.4中。

浓度：0.8-3.0 mg/ml
外观：乳状液体
吸光度比例（Absorbance Ratio）：Dil/Protein=555nm/275nm=1.30
缓冲液组分（Buffer Components）：0.02 mM EDTA in PBS, pH 7.4
储存条件：4℃，无菌避光，有效期6周


His标签蛋白纯化预装柱 蛋白质研究关键词：SY0394,Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML,His标签蛋白纯化预装柱


·HSF-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号：SY0079
英文名称：HSF luciferase reporter plasmid
规格：1μg
HSF荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（HSF luciferase reporter plasimd）是用于检测HSF转录活性水平为目的的报告基因。HSF(heat shock transcription factors)主要在于控制热应激反应的动态平衡。

HSF报告基因主要通过检测细胞中热休克转录因子的转录活性来检测热休克反应、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMHSF-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个HSF结合位点，可以高灵敏度地检测HSF的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得HSF报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
pGMHSF-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

储存条件：-20℃。

我公司生产供应销售的蛋白质研究正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购His标签蛋白纯化预装柱 蛋白质研究。