北京MTF1-GFP报告基因质粒厂家

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北京百奥莱博专业生产供应北京MTF1-GFP报告基因质粒厂家，我公司销售全品类的细胞生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京MTF1-GFP报告基因质粒厂家
规格：1μg
编号：SY0166
英文名：MTF1 GFP Reporter Plasmid
产地：国产|进口
MTF1 GFP Reporter Plasmid是用于检测MTF1转录活性水平为目的的报告基因。MTF1(Metal regulatory transcription factor 1)对重金属诱导的金属硫蛋白以及涉及体内金属平衡和细胞应激反应的基因的转录调控起关键的作用。

MTF1-GFP报告基因主要检测细胞Heavy Metal Stress信号通路中MTF1的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMMTF1-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个MTF1结合位点，可以高效地检测MTF1的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得MTF1-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM MTF1 -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMMTF1-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

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·碱性磷酸酶活性检测试剂盒
编号：SY0467
英文名称：Alkaline Phosphatase Activity Detection Kit
规格：100T
本品为碱性磷酸酶活性检测试剂盒，可快速、便捷地检测细胞或组织裂解液/匀浆液、血清、血浆、尿液、纯化酶等样品中的ALP活性。该试剂盒包括标准品和空白对照，可进行达100个样品的检测。

碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，简写为ALP或AKP），又称碱性磷酸酯酶，是一组同工酶，目前已发现六种ALP1-ALP6。广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织，是经肝脏向胆外排出的一种酶。碱性条件下可催化磷酸酯键的水解，从而将底物分子上的磷酸基团去除，转化为羟基。此类底物包括核酸（DNA、RNA）、蛋白、生物碱等。常见的有肠道碱性磷酸酶、非组织特异性碱性磷酸酶、胎盘碱性磷酸酶等；生物学中碱性磷酸酶（ALP）水平的变化及其活性的高低常被作为一种检测组织行为的指标，如：1）作为iPS成功诱导的标志；ALP在大多数细胞类型中均有表达，但是在iPS细胞内的表达水平明显升高；2）结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标；3）血清中碱性磷酸酯酶的升高可导致高碱性磷酸酶血症，常被认为和恶性胆管阻塞，原发性硬化胆管炎，肝癌，肝硬化等肝胆疾病密切相关；4）血清中碱性磷酸酶活性升高还和骨骼损伤导致的骨生成，以及骨骼疾病如纤维骨炎、佝偻病、成骨不全等密切相关；5）碱性磷酸酶水平也会出现一些病理性降低的情况，多见于重症慢性肾炎、儿童甲状腺机能不全、贫血等。对于正常成人来说，血清内ALP的范围为40-150U/L。

对硝基苯磷酸（p-nitrophenyl phosphate, pNPP）是一种常用的磷酸酶显色底物，碱性条件下，可在ALP作用下生成对硝基苯酚（p-nitrophenol, pNP），后者在碱性环境下呈黄色产物，并在405nm处可检测到最大吸收峰。产物黄色越深，说明ALP活性越高，反之则活性越低。因此，通过检测OD405吸光值即可计算ALP活性水平。

产品规格：

ALP反应缓冲液 ALP Assay Buffer	15ml	-20℃
显色底物 pNPP Substrate	2管	-20℃避光
pNP标准品溶液p-nitrophenol Standard	100ul (10mM)	-20℃避光
反应终止液 Stop Solution	12ml	-20℃

储存条件：-20℃，有效期一年。

注意事项
1） 如果进行酶活力的绝对定量，进行酶反应时必须注意精确计时。此时推荐孵育30min等较长时间，以减小操作过程中的时间误差。如果样品中酶活性较高，则可以预先适当稀释样品。
2）样品溶液中须避免出现EDTA、氟离子、柠檬酸盐等碱性磷酸酶抑制剂。
3）ALP反应缓冲液和p-nitrophenol标准品溶液对人体有害，请注意适当防护。反应终止液有腐蚀性，请小心操作。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 试剂准备
将所有试剂取出，恢复至室温使用。
1） 显色底物溶液：取一管显色底物，溶解于2.5ml的ALP反应缓冲液中，充分溶解和混匀，冰上放置。注意：新鲜配制的显色底物溶液需在数小时（≤ 6h）内使用。
2） 标准品工作液：取10μl p-nitrophenol标准品溶液(10mM)，用ALP反应缓冲液稀释至0.2ml，使得终浓度为0.5mM。

2．样品准备
1） 细胞或组织裂解液的准备：采用适当细胞或组织裂解液裂解细胞和组织，如果有必要需进行适当匀浆，随后离心取上清，用于ALP活性的检测。注意：裂解液中不能含有磷酸酶抑制剂。样品可以-80℃冻存，避免反复冻融。
2） 血浆、血清和尿液的准备：血浆和血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。注意：血浆制备不能用含EDTA和柠檬酸盐的抗凝管。尿液通常也可以直接用于测定。上述样品可以-80℃冻存，避免反复冻融。
3） 样品的稀释：若样品中含有较高活性的ALP，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，也可以采用试剂盒中的ALP反应缓冲液进行稀释。若使用上述反应缓冲液进行稀释，需保留足够的缓冲液用于试剂盒的检测过程。

3．加样
参考下表使用96孔板设置空白对照孔、标准品孔和样品孔。标准品的用量分别为4、8、16、24、32和 40μl，样品通常可以直接加50μl。如果样品中的碱性磷酸酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

表1 各组分加样数据表

	空白对照（Blank）	标准品（Standard）	样品（Sample）
ALP反应缓冲液	50μl	(100-x)μl	(50-y) μl
显色底物	50μl	－	50μl
样品	－	－	yμl
标准品工作液	－	xμl	－

4. 混匀：用枪头轻轻吹打混匀，也可借助摇床进行混匀。

5. 孵育：37℃孵育5-10min。（待测样品中ALP活性较低时，可适当延长孵育时间至30min）

6. 终止：每孔加入100μl反应终止液终止反应。此时，标准品或有ALP活性的孔会呈现不同深浅的黄色。

7. 检测：405nm测定吸光度。如果不能测定405nm，也可以在400-415nm范围内检测吸光度。如果不能立即测定，可以在数小时内完成测定，所显现的黄色在数小时（≤ 6h）内稳定。

8. 结果分析
碱性磷酸酶活性单位的定义：在pH9.8的二乙醇胺（diethanolamine, DEA）缓冲液中，37℃条件下，每分钟水解pNPP显色底物产生1μm p-nitrophenol所需的ALP量定义为一个酶活力单位，也被称作一个DEA酶活力单位。在pH9.6的甘氨酸缓冲液中，25℃条件下，每分钟水解pNPP显色底物产生1μm p-nitrophenol所需的ALP量定义为一个酶活力单位，也被称作一个甘氨酸酶活力单位。一个甘氨酸酶活力单位约相当于3个DEA酶活力单位。本试剂盒测定的是DEA酶活力单位。

最后，根据酶活性单位的定义，计算出样品中的碱性磷酸酶活性。


北京MTF1-GFP报告基因质粒厂家关键词：SY0166,MTF1-GFP报告基因质粒,MTF1 GFP Reporter Plasmid

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L-色氨酸 PAO 73-22-3
肌氨酸甲酯盐酸盐 Amygdalin 13515-93-0
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5-氨基乙酰丙酸盐酸盐 Heptadecanoic acid 5451-09-2
异烟酸 HNTU 55-22-1

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